{"id":96618,"date":"2018-03-11T10:16:52","date_gmt":"2018-03-11T10:16:52","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/analisis-funcional-de-la-proteina-3a-del-virus-de-la-fiebre-aftosa\/"},"modified":"2018-03-11T10:16:52","modified_gmt":"2018-03-11T10:16:52","slug":"analisis-funcional-de-la-proteina-3a-del-virus-de-la-fiebre-aftosa","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/biologia-molecular\/analisis-funcional-de-la-proteina-3a-del-virus-de-la-fiebre-aftosa\/","title":{"rendered":"Analisis funcional de la proteina 3a del virus de la fiebre aftosa"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Raul Postigo Fernandez <\/strong><\/h2>\n<p>Abreviaturas abreviaturas 1 resumen en ingl\u00e9s resumen en ingl\u00e9s 7 introducci\u00f3n i-1 la fiebre aftosa 11 i-2 el virus de la fiebre aftosa 13 i-2-1 genoma del vfa 14 i-2-2 prote\u00ednas del vfa 15 i-2-3 ciclo infectivo 17 i-2-3-1 internalizaci\u00f3n celular 17 i-2-3-2 traducci\u00f3n y procesamiento proteol\u00edtico 18 i-2-3-3 replicaci\u00f3n del arn 20 i-2-3-4 encapsidaci\u00f3n y maduraci\u00f3n 23 i-2-4 la prote\u00edna 3a de los picornavirus 24 i-2-4-1 prote\u00edna 3a de poliovirus 27 i-2-4-2 prote\u00edna 3a del vfa 29 objetivos objetivos 35 material y m\u00e9todos m-1 lineas celulares y v\u00edrus 39 m-2 clones infecciosos 40 m-3 anticuerpos 41 m-4 cultivo de c\u00e9lulas 42 m-5 crecimiento de v\u00edrus 42 m-6 obtenci\u00f3n de adn plasm\u00eddico 43 m-7 extracci\u00f3n de arn 43 m-8 clonaje molecular: clones infecciosos de la prote\u00edna 3a 43 m-8-1 metodolog\u00eda empleada para la construcci\u00f3n de los clones infecciosos mutantes 45 m-8-1-1 deleci\u00f3n de la prote\u00edna 3a del vfa. Mutante pmt28- 3a 45 m-8-1-2 mutante de inserci\u00f3n pmt28-g-3a-g 47 m-8-1-3 mutante de inserci\u00f3n pmt28-g-3a 48 m-8-1-4 sustituci\u00f3n de la prote\u00edna 3a por su hom\u00f3loga del vre-a. 48 mutantes pmt28-3a-vre-c y pmt28-3a-vre-i m-8-1-5 mutantes puntuales 49 m-9 construcci\u00f3n de pl\u00e1smidos derivados del prsv portando versiones 51 mutadas de la prote\u00edna 3a del vfa m-10 transcripci\u00f3n in vitro 52 m-11 transfecci\u00f3n en cultivos celulares 53 m-11-1 transfecci\u00f3n con arn 53 m-11-2 transfecci\u00f3n con adn 53 m-12 titulaci\u00f3n de virus 53 m-13 determinaci\u00f3n de la infectividad esppec\u00edfica del arn de los mutantes. 54 m-14 traducci\u00f3n in vitro 54 m-14-1 cuantificaci\u00f3n de incorporaci\u00f3n de radiactividad 54 m-14-2 an\u00e1lisis de las prote\u00ednas marcadas con 35s mediante electroforesis en gel de poliacrilamida 55 m-15 ensayo de sensibilidad a brefeldina a 55 m-16 condiciones empleadas en las amplificaciones por pcr 55 m-16-1 rt-pcr 56 m-16-2 pcr en tiempo real 56 m-17 inmunoensayos 57 m-17-1 western-blot 57 m-17-2 inmunoprecipitaci\u00f3n 58 m-17-3 inmunofluorescencia 59 m-18 ensayo de letalidad en rat\u00f3n lactante 59 m-19 m\u00e9todos estad\u00edsticos y tratamiento de datos 60 m-20 disoluciones y tampones 60 m-21 oligonucle\u00f3tidos 61 resultados r-1 construcci\u00f3n de clones infecciosos del vfa para la obtenci\u00f3n de virus mutantes en 3a 65 r-1-1 mutantes de delecci\u00f3n 66 r-1-2 mutantes de inserci\u00f3n 67 r-1-3 mutantes de reemplazo de 3a 68 r-1-4 mutantes puntuales 71 r-2 s\u00edntesis y procesamiento in vitro de la poliprote\u00edna viral de los distintos mutantes de 3a 74 r-3 infectividad del arn de mutantes de 3a en cultivos celulares 78 r-3-1 citopatogenicidad de mutantes de 3a en c\u00e9lulas bhk-21 78 r-3-2 citopatogenicidad de mutantes de 3a en c\u00e9lulas vero 81 r-3-3 producci\u00f3n de virus infectivos a partir del arn de los mutantes de la prote\u00edna 3a 82 r-3-3-1 infectividad espec\u00edfica del arn de los mutantes de 3a 82 r-3-3-2 cuantificaci\u00f3n de la producci\u00f3n viral de mutantes de la prote\u00edna 3a 84 r-3-4 expresi\u00f3n de prote\u00ednas virales de los mutantes de la prote\u00edna 3a en cultivos celulares 86 r-3-4-1 an\u00e1lisis mediante western-blot 86 r-3-4-2 an\u00e1lisis por inmunofluorescencia de productos virales en c\u00e9lulas transfectadas con arn de mutantes de la prote\u00edna 3a 89 r-3-5 estudio de la expresi\u00f3n transitoria de las prote\u00ednas mutadas en los residuos l38e y l41e 92 r-3-6 an\u00e1lisis de la producci\u00f3n de arn viral en c\u00e9lulas transfectadas con arn de mutantes de 3a 94 r-3-6-1 detecci\u00f3n de la producci\u00f3n de arn viral por rt-pcr semicuantitativa 94 r-3-6-2 rt-pcr a tiempo real 95 r-4 evaluaci\u00f3n de la posible complementaci\u00f3n en trans de mutantes de la prote\u00edna 3a 97 r-4-1 producci\u00f3n de ecp por arn de mutantes de la prote\u00edna 3a en clones celulares que expresan 3a o 3abbb 98 r-4-2 producci\u00f3n viral de mutantes de la prote\u00edna 3a en clones celulares que expresan 3a o 3abbb 101 r-5 patogenicidad de los arns de mutantes de 3a en rat\u00f3n lactante 103 discusi\u00f3n d estudio funcional de la prote\u00edna 3a 109 d-1 mutantes de deleci\u00f3n de 3a 111 d-2 mutantes de sustituci\u00f3n por la prote\u00edna 3a del vre-a 115 d-3 mutantes de inserci\u00f3n 117 d-4 mutante pmt28-c65s 120 d-5 mutantes pmt28-q44r y pmt28-q44d 120 d-6 mutantes pmt28-l38e y pmt28-l41e 122 d-7 consideraciones finales 124 conclusiones conclusiones 129 bibliograf\u00eda bibliograf\u00eda 133 anexo rosas, m. F., Y. A. Vieira, r. Postigo, m. A. Martin-acebes, r. Armas-portela, e. Martinez-salas, and f. Sobrino. 2008. Susceptibility to viral infection is enhanced by stable expression of 3a or 3ab proteins from foot-and-mouth disease virus. Virology 380:34-45.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Analisis funcional de la proteina 3a del virus de la fiebre aftosa<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Analisis funcional de la proteina 3a del virus de la fiebre aftosa <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Raul Postigo Fernandez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 16\/10\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Francisco Sobrino Castello<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: esperanza Gomez-lucia duato <\/li>\n<li>Juan  Carlos S\u00e1iz calahorra (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 ignacio N\u00fa\u00f1ez garrote (vocal)<\/li>\n<li>alejandro Brun torres (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Raul Postigo Fernandez Abreviaturas abreviaturas 1 resumen en ingl\u00e9s resumen en ingl\u00e9s 7 introducci\u00f3n i-1 la fiebre 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