{"id":96718,"date":"2018-03-11T10:17:03","date_gmt":"2018-03-11T10:17:03","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/ca2-atpasa-y-muerte-celular-inducida-por-ca2-en-celulas-carda%c2%adacas-h9c2\/"},"modified":"2018-03-11T10:17:03","modified_gmt":"2018-03-11T10:17:03","slug":"ca2-atpasa-y-muerte-celular-inducida-por-ca2-en-celulas-carda%c2%adacas-h9c2","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica-molecular\/ca2-atpasa-y-muerte-celular-inducida-por-ca2-en-celulas-carda%c2%adacas-h9c2\/","title":{"rendered":"Ca2+ -atpasa y muerte celular inducida por ca2+ en c\u00e9lulas card\u00edacas h9c2"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Antonio  Manuel Lax P\u00e9rez <\/strong><\/h2>\n<p>El plan de trabajo de esta tesis doctoral plantea dos objetivos generales: estudiar el fen\u00f3meno de desacoplamiento energ\u00e9tico ocasionado durante la actuaci\u00f3n de la enzima ca2+-atpasa de rs (serca) en determinadas condiciones experimentales; y la caracterizaci\u00f3n de procesos relacionados con alteraciones del ca2+ intracelular que est\u00e1n implicados en la activaci\u00f3n de muerte celular por apoptosis.    la hidr\u00f3lisis de atp que se observa al poner ves\u00edculas de ret\u00edculo sarcopl\u00e1smico (rs) en presencia de mg2+ y ausencia de ca2+ se debe a la actividad catal\u00edtica de la enzima ca2+-atpasa. La velocidad de hidr\u00f3lisis de atp  medida a ph neutro y en presencia de mg2+ 5 mm  muestra una dependencia hiperb\u00f3lica cuando se expresa en funci\u00f3n de la concentraci\u00f3n de atp. La hidr\u00f3lisis del sustrato atp-mg2+ se inhibe tanto por mg2+ libre como por atp libre pero no se ve afectada por la presencia de vanadato. La velocidad de hidr\u00f3lisis del pseudo-sustrato pnpp en ausencia de ca2+ no se altera por la presencia de an\u00e1logos no hidrolizables de atp. La afinidad de uni\u00f3n de atp a la enzima  a ph neutro y ausencia de ca2+  aumenta con la concentraci\u00f3n de mg2+, pero disminuye con la de vanadato cuando mg2+ est\u00e1 presente. Los resultados obtenidos indican que: (i) la uni\u00f3n de ca2+ al enzima no es un requerimiento necesario para observar una hidr\u00f3lisis lenta de atp; (ii) la hidr\u00f3lisis de atp-mg2+ en ausencia de ca2+ requiere un cambio conformacional de la enzima que permita la aproximaci\u00f3n de los dominios citos\u00f3licos; (iii) la actividad hidrol\u00edtica independiente de ca2+ es importante cuando la concentraci\u00f3n de ca2+ en el citosol es muy baja -nivel basal o estado de reposo de la c\u00e9lula- o cuando la uni\u00f3n de ca2+ a la enzima est\u00e1 bloqueada. Esta \u00faltima situaci\u00f3n est\u00e1 relacionada con el mecanismo de inhibici\u00f3n por tapsigargina (tg) y por otros muchos inhibidores de la enzima. la caracterizaci\u00f3n de dep\u00f3sitos intracelulares y flujos de ca2+ en c\u00e9lulas h9c2 se ha realizado con ayuda de indicadores fluorescentes y compuestos que movilizan ca2+. Vasopresina da lugar a un aumento transitorio de ca2+ citos\u00f3lico, siendo 6 nm la concentraci\u00f3n que produce la mitad del efecto m\u00e1ximo mientras que 3 nm es la concentraci\u00f3n de tg que produce la mitad del efecto m\u00e1ximo. La despolarizaci\u00f3n de la membrana interna mitocondrial mediante un proton\u00f3foro tambi\u00e9n ocasiona un aumento en el nivel de ca2+ citos\u00f3lico. El ion\u00f3foro ionomicina (io) induce un peque\u00f1o descenso del   m que se mantiene a lo largo del tiempo mientras que tg provoca un descenso peque\u00f1o que es transitorio. El dep\u00f3sito de ca2+ sensible a tg es tambi\u00e9n sensible a io mientras que el dep\u00f3sito sensible a proton\u00f3foro no lo es. El aumento transitorio del ca2+ mitocondrial no se inhibe por ciclosporina a (csa) cuando la descarga reversible del dep\u00f3sito del ret\u00edculo sarco-endopl\u00e1smico (rse) se produce mediante la adici\u00f3n de vasopresina. Sin embargo, el aumento transitorio del ca2+ mitocondrial se inhibe por csa cuando se produce una descarga irreversible del ca2+ almacenado en el rse mediante tg. Estas observaciones indican que la mitocondria es capaz de interpretar las se\u00f1ales de ca2+ citos\u00f3lico que se generan en el dep\u00f3sito intracelular del rse. la adici\u00f3n de tg 10  m a c\u00e9lulas h9c2 produce un aumento transitorio de ca2+ citos\u00f3lico que tiene dos componentes. Experimentos realizados en un medio sin ca2+ demuestran el origen intracelular de ambos componentes. El primer componente corresponde a salida de ca2+ del rse. El segundo componente est\u00e1 asociado a despolarizaci\u00f3n de la membrana interna mitocondrial y su aparici\u00f3n se evita al preincubar las c\u00e9lulas con csa. Esto indica el origen mitocondrial de este componente y que la salida de ca2+ de la mitocondria est\u00e1 relacionada con la apertura del poro de permeabilidad transitoria (ptp). El tratamiento con tg 10  m  que da lugar a un aumento de ca2+ citos\u00f3lico con dos componentes  produce muerte celular antes que cuando se trata con tg 3  m  que origina solo el primer componente-. En ambos casos se observa fragmentaci\u00f3n de cromatina y condensaci\u00f3n en la periferia del n\u00facleo. P\u00e9rdida de contenido en dna y ruptura hidrol\u00edtica de poliadp-ribosa polimerasa son otras caracter\u00edsticas observadas que son dependientes de la concentraci\u00f3n de tg y que se producen en diferentes ventanas de tiempo. La muerte apopt\u00f3tica inducida por       tg 10  m se debe a apertura del ptp mitocondrial.  \tel da\u00f1o producido por tg 3  m \u00f3 tunicamicina &#8482; 1  g\/ml sobre el rs ocasiona la p\u00e9rdida de viabilidad de la poblaci\u00f3n celular en aproximadamente 72 h. La liberaci\u00f3n de citocromo c (cit c) de la mitocondria ocurre inmediatamente despu\u00e9s del da\u00f1o siendo simult\u00e1nea o posterior a la translocaci\u00f3n de bax a la mitocondria. La liberaci\u00f3n de cit c no est\u00e1 relacionada con despolarizaci\u00f3n mitocondrial ni con activaci\u00f3n de caspasas. El da\u00f1o irreversible producido sobre el rs  detectado por la activaci\u00f3n de caspasa 12 en la fase inicial del proceso   provoca la activaci\u00f3n de la ruta apopt\u00f3tica mitocondrial. La preincubaci\u00f3n de c\u00e9lulas con un inhibidor selectivo para caspasa 8 \u00f3 caspasa 9 bloquea la proteolisis selectiva de caspasa 3 mientras que la preincubaci\u00f3n con un inhibidor de caspasa 9 bloquea la activaci\u00f3n de caspasa 8. Esto indica que caspasa 8 forma parte de un bucle de retroalimentaci\u00f3n positiva que produce amplificaci\u00f3n de la cascada de activaci\u00f3n de caspasas. La inhibici\u00f3n de caspasas con un inhibidor general no protege de la muerte celular lo que sugiere la existencia de mecanismos alternativos de muerte que no son dependientes de caspasas. la adici\u00f3n de tg 10  m a c\u00e9lulas h9c2 produce liberaci\u00f3n de cit c de la mitocondria que est\u00e1 asociada a una r\u00e1pida disminuci\u00f3n del   m. En cambio, la liberaci\u00f3n de cit c inducida por estaurosporina (st) 50 nm est\u00e1 mediada por la activaci\u00f3n de bax sin que se altere el   m. La acumulaci\u00f3n de cit c en el citosol alcanza niveles similares en ambos casos, lo que indica que la magnitud de la liberaci\u00f3n es independiente del mecanismo de permeabilizaci\u00f3n de la membrana externa mitocondrial. Cualquiera de los dos inductores de apoptosis produce activaci\u00f3n de caspasa 9  caspasa iniciadora  y caspasa 3  caspasa efectora  as\u00ed como del bucle de amplificaci\u00f3n de la fase ejecutora de la apoptosis en el que interviene caspasa 8. La liberaci\u00f3n de cit c que produce alteraci\u00f3n funcional de la mitocondria se produce antes cuando se induce con tg 10  m que con st 50 nm. Sin embargo, las alteraciones morfol\u00f3gicas de la c\u00e9lula y la condensaci\u00f3n de cromatina se desarrollan antes cuando se incuba con st 50 nm. El inhibidor general de caspasas no protege de la condensaci\u00f3n de cromatina inducida por st 50 nm. Por tanto, la alteraci\u00f3n funcional de la mitocondria est\u00e1 directamente relacionada con la cin\u00e9tica de liberaci\u00f3n de cit c pero el hecho de que tg 10  m provoque antes que st 50 nm la alteraci\u00f3n mitocondrial no significa que las alteraciones estructurales de la c\u00e9lula se produzcan antes en presencia de tg. Esto sugiere la existencia de programas de muerte celular que son independientes de caspasas.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Ca2+ -atpasa y muerte celular inducida por ca2+ en c\u00e9lulas card\u00edacas h9c2<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Ca2+ -atpasa y muerte celular inducida por ca2+ en c\u00e9lulas card\u00edacas h9c2 <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Antonio  Manuel Lax P\u00e9rez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Murcia<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 23\/10\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Fernando Soler Pardo<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Juan  carmelo Gomez fernandez <\/li>\n<li>Ana Linares gil (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  paz Carrasco jimenez (vocal)<\/li>\n<li>m. isabel Fortea gorbe (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Antonio Manuel Lax P\u00e9rez El plan de trabajo de esta tesis doctoral plantea dos objetivos generales: estudiar 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