{"id":96858,"date":"2018-03-11T10:17:12","date_gmt":"2018-03-11T10:17:12","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/vacunacion-y-diagnostico-de-la-leishmaniosis-visceral-mediante-protea%c2%adnas-recombinantes-de-leishmania-infantum-producidas-en-larvas-de-insecto\/"},"modified":"2018-03-11T10:17:12","modified_gmt":"2018-03-11T10:17:12","slug":"vacunacion-y-diagnostico-de-la-leishmaniosis-visceral-mediante-protea%c2%adnas-recombinantes-de-leishmania-infantum-producidas-en-larvas-de-insecto","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/parasitologia-animal\/vacunacion-y-diagnostico-de-la-leishmaniosis-visceral-mediante-protea%c2%adnas-recombinantes-de-leishmania-infantum-producidas-en-larvas-de-insecto\/","title":{"rendered":"\u00abvacunaci\u00f3n y diagn\u00f3stico de la leishmaniosis visceral mediante prote\u00ednas recombinantes de leishmania infantum producidas en larvas de insecto\u00bb"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Felicitat Todol\u00ed Sim\u00f3 <\/strong><\/h2>\n<p>La leishmaniosis es una enfermedad parasitaria causada por protozoos del g\u00e9nero leishmania y transmitida por la picadura de insectos d\u00edpteros. Es end\u00e9mica en 88 pa\u00edses, 72 de los cuales se encuentran en v\u00edas de desarrollo. Se calcula que m\u00e1s de 12 millones de personas la sufren y que cada a\u00f1o se producen 2 millones de nuevos casos, de los cuales 500 000 son debidos a leishmaniosis visceral (vl), la forma m\u00e1s grave y a menudo mortal de la enfermedad. En la forma zoon\u00f3tica de la leishmaniosis visceral (zvl) causada por l. Infantum, el principal reservorio peridom\u00e9stico del par\u00e1sito es el perro. El control de la zvl se basa actualmente en el diagn\u00f3stico y el tratamiento o sacrificio de los perros infectados, as\u00ed como en la prevenci\u00f3n de la infecci\u00f3n mediante el uso de insecticidas. Para mejorar el diagn\u00f3stico de estos animales, ser\u00eda de inter\u00e9s el hallazgo de prote\u00ednas inmun\u00f3genas del par\u00e1sito que pudieran sustituir al ant\u00edgeno crudo total de leishmania (ctla) y la leishmanina empleados actualmente, lo cual permitir\u00eda la estandarizaci\u00f3n, reproducibilidad y comercializaci\u00f3n de nuevas pruebas de diagn\u00f3stico inmunol\u00f3gico m\u00e1s exactas. Sin embargo, la mejor estrategia de control de esta enfermedad seg\u00fan indican los modelos matem\u00e1ticos, ser\u00eda el desarrollo de una vacuna eficaz. Por el momento, dos vacunas contra la leishmaniosis canina (canl) han sido registradas y comercializadas en brasil, pero ninguna en europa. Diversas estrategias de vacunaci\u00f3n han sido ensayadas contra leishmania sp. Y, de todas ellas, la prime-boost es la que parece m\u00e1s prometedora. De este modo, la vacunaci\u00f3n conjunta con dna y prote\u00ednas recombinantes podr\u00eda constituir una herramienta eficaz para el control de la zvl.   el objetivo general de esta tesis ha sido evaluar la utilidad de cuatro ant\u00edgenos recombinantes de l. Infantum (rkmpii, rtryp, rlack y rpaple22) en el control de la zvl mediante su utilizaci\u00f3n  en t\u00e9cnicas de diagn\u00f3stico inmunol\u00f3gico humoral (estudio 1) y celular (estudio 2) en perros, y en diferentes estrategias de vacunaci\u00f3n en h\u00e1msters (estudio 3). Para ello, empleamos extractos crudos de larvas de trichoplusia ni infectadas con baculovirus conteniendo las prote\u00ednas recombinantes rkmpii, rtryp, rlack y rpaple22 sin purificar. Las larvas de insectos lepid\u00f3pteros infectadas con baculovirus son uno de los sistemas m\u00e1s potentes y vers\u00e1tiles para la producci\u00f3n de prote\u00ednas recombinantes, ya que permiten la obtenci\u00f3n de grandes cantidades de prote\u00edna con la mayor\u00eda de modificaciones postraduccionales de los eucariotas y a bajo coste.   la respuesta humoral y celular contra estas prote\u00ednas fue evaluada mediante elisa y mediante prueba de hipersensibilidad retardada (dth) en perros con leishmaniosis patente y en perros infectados sanos. La sensibilidad y especificidad de las t\u00e9cnicas basadas en los ant\u00edgenos recombinantes se compararon con el elisa basado en ctla  y con la prueba de dth empleando leishmanina (lst), respectivamente. La utilidad de estos ant\u00edgenos en la vacunaci\u00f3n fue evaluada en tres estrategias diferentes en el modelo de leishmaniosis de vl de h\u00e1mster: prote\u00edna, dna y prime-boost heter\u00f3logo con dna-prote\u00edna. La inmunogenicidad de las vacunas fue valorada mediante la medici\u00f3n de los niveles de anticuerpos vacunales, la producci\u00f3n de \u00f3xido n\u00edtrico (no) y la capacidad parasiticida de los macr\u00f3fagos infectados in vitro. La eficacia de las vacunas se evalu\u00f3 mediante la determinaci\u00f3n de la carga parasitaria en sangre y bazo, los niveles de anticuerpos contra el par\u00e1sito y la histopatolog\u00eda a las 20 semanas tras la infecci\u00f3n con l. Infantum.  el an\u00e1lisis de la respuesta humoral espec\u00edfica en el estudio 1 mostr\u00f3 que el 75 % de los perros enfermos con serolog\u00eda positiva frente al ant\u00edgeno crudo presentaba anticuerpos contra rkmpii, el 50 % contra rtryp y el 42 % contra rlack. Estos resultados demuestran que los tres ant\u00edgenos, pero especialmente kmpii, son inmun\u00f3genos de las c\u00e9lulas b durante la canl. En 2 de los 5 perros con canl del estudio 2 se detectaron anticuerpos contra rpaple22, demostrando que este ant\u00edgeno es tambi\u00e9n un inmun\u00f3geno de linfocitos b. No obstante, la estimaci\u00f3n de la seropreValencia contra este \u00faltimo ant\u00edgeno requerir\u00eda estudios con un mayor n\u00famero de animales. La combinaci\u00f3n de los elisa de rkmpii, rtryp y rlack en paralelo para el diagn\u00f3stico de la canl tuvo una sensibilidad del 93 % y una especificidad del 97 % no diferentes de las obtenidas con ctla-elisa, demostrando as\u00ed que los tres ant\u00edgenos producidos en larvas de t. Ni pueden ser utilizados para obtener una t\u00e9cnica sensible, espec\u00edfica, reproducible y de bajo coste para el diagn\u00f3stico de los perros con canl. Sin embargo, los perros infectados sin signos cl\u00ednicos incluidos en el estudio 2 no presentaron anticuerpos frente a ctla y por tanto, tampoco frente a las prote\u00ednas recombinantes.  la evaluaci\u00f3n de la respuesta celular in vivo mediante dth en una poblaci\u00f3n de perros residentes en zona end\u00e9mica (estudio 2) mostr\u00f3 que el 27 % de los perros infectados presentaba una reacci\u00f3n dth positiva contra el ant\u00edgeno rkmpii, el 50 % contra rtryp, el 18 % contra  rlack y el 18 % contra rpaple22. Estos resultados demuestran que los cuatro ant\u00edgenos, pero especialmente tryp, son capaces de estimular la respuesta de las c\u00e9lulas t durante la infecci\u00f3n por l. Infantum. La combinaci\u00f3n de los resultados de las pruebas de dth empleando rtryp y rkmpii en paralelo consigui\u00f3 un 78 % tanto de sensibilidad como de especificidad, no diferente de la obtenida con lst, sugiriendo que ambos ant\u00edgenos pueden ser componentes de una t\u00e9cnica de dth para el diagn\u00f3stico de los perros infectados. La evaluaci\u00f3n de la respuesta celular mediante lst o la combinaci\u00f3n de los resultados de dth de kmpii y rtryp en paralelo constituyeron las t\u00e9cnicas m\u00e1s sensibles para el diagn\u00f3stico de los perros infectados sin signos cl\u00ednicos, superiores a la pcr cuantitativa en sangre. El papel que tryp parece desarrollar sobre la respuesta inmunitaria de los perros con infecci\u00f3n subcl\u00ednica, sugiere que este ant\u00edgeno puede ser un prometedor candidato vacunal contra la canl. El escaso papel de rkmpii, rlack o rpaple22 en la respuesta celular en los perros con infecci\u00f3n subcl\u00ednica, en contraste con su elevado a moderado papel en la respuesta humoral durante la canl sugiere que estos ant\u00edgenos deben ser empleados en estrategias de vacunaci\u00f3n capaces de inducir una respuesta th1.  de las tres estrategias de vacunaci\u00f3n ensayadas en el modelo de leishmaniosis de h\u00e1mster con estos cuatro ant\u00edgenos, la prime-boost heter\u00f3loga con dna-prote\u00edna fue la que la que obtuvo un mayor grado de protecci\u00f3n frente a la infecci\u00f3n experimental con l. Infantum. Esta estrategia indujo un aumento significativo en la producci\u00f3n de no en los macr\u00f3fagos infectados in vitro, as\u00ed como una disminuci\u00f3n significativa de la carga parasitaria en bazo (86 %) y sangre (99 %), y una disminuci\u00f3n de los niveles de anticuerpos contra el par\u00e1sito post-infecci\u00f3n. Asimismo, la vacunaci\u00f3n dna-prote\u00edna redujo significativamente la aparici\u00f3n de ciertas alteraciones histopatol\u00f3gicas en bazo e h\u00edgado relacionadas con la enfermedad en relaci\u00f3n con el grupo control. Por su parte, la vacunaci\u00f3n con dna desnudo no estimul\u00f3 la producci\u00f3n de no, pero consigui\u00f3 una disminuci\u00f3n significativa del 90 % de la carga parasitaria en bazo, aunque no en sangre. Tras la vacunaci\u00f3n con prote\u00ednas no se detect\u00f3 inmunogenicidad ni protecci\u00f3n. Los resultados demuestran que la estrategia prime-boost es capaz de estimular una potente respuesta celular, superior a la obtenida con prote\u00ednas recombinantes o con dna desnudo utilizando los mismos ant\u00edgenos, la cual es adem\u00e1s capaz de inducir un elevado grado de protecci\u00f3n contra l. Infantum.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>\u00abvacunaci\u00f3n y diagn\u00f3stico de la leishmaniosis visceral mediante prote\u00ednas recombinantes de leishmania infantum producidas en larvas de insecto\u00bb<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 \u00abvacunaci\u00f3n y diagn\u00f3stico de la leishmaniosis visceral mediante prote\u00ednas recombinantes de leishmania infantum producidas en larvas de insecto\u00bb <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Felicitat Todol\u00ed Sim\u00f3 <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de barcelona<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 29\/10\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jordi Alberola Domingo<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: montserrat G\u00e1llego  culler\u00e9 <\/li>\n<li>Francisco Javier Nieto  mart\u00ednez (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Felicitat Todol\u00ed Sim\u00f3 La leishmaniosis es una enfermedad parasitaria causada por protozoos del g\u00e9nero leishmania y transmitida 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