{"id":97024,"date":"2009-05-11T00:00:00","date_gmt":"2009-05-11T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/aislamiento-y-caracterizacion-de-mutantes-insercionales-de-chlamydomonas-insensibles-a-la-senal-positiva-de-nitrato\/"},"modified":"2009-05-11T00:00:00","modified_gmt":"2009-05-11T00:00:00","slug":"aislamiento-y-caracterizacion-de-mutantes-insercionales-de-chlamydomonas-insensibles-a-la-senal-positiva-de-nitrato","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica-molecular\/aislamiento-y-caracterizacion-de-mutantes-insercionales-de-chlamydomonas-insensibles-a-la-senal-positiva-de-nitrato\/","title":{"rendered":"Aislamiento y caracterizacion de mutantes insercionales de chlamydomonas insensibles a la se\u00f1al positiva de nitrato"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Jos\u00e9 Javier Higuera Sobrino <\/strong><\/h2>\n<p>La asimilaci\u00f3n de nitrato es la ruta m\u00e1s importante para la adquisici\u00f3n de nitr\u00f3geno y est\u00e1 altamente regulada por la disponibilidad de nutrientes y factores ambientales. En el contexto de la regulaci\u00f3n, el nitrato tiene un papel fundamental como se\u00f1alizador positivo que permite la puesta en marcha y la expresi\u00f3n de una serie de genes esenciales de esta ruta. Sin embargo, en eucariotas fotosint\u00e9ticos, no se conocen bien los mecanismos de c\u00f3mo se siente el nitrato ni los genes reguladores implicados en este proceso. con este objetivo se construyo una colecci\u00f3n de mutantes insercionales (mutateca) de chlamydomonas (1) donde todos los genes del alga estuvieran etiquetados y nos permitieran la b\u00fasqueda de genes involucrados en la asimilaci\u00f3n de nitrato. La mutateca se ha construido a partir de la estirpe 704 de chlamydomonas, que porta un gen reportero como sensor de nitrato\/amonio (pnia1:ars)(2), y como marcador seleccionable se ha utilizado el gen aphviii (psi104)(3) que confiere resistencia a paramomicina. De un total de 22.000 mutantes escrutados, 145 parecen estar relacionados con la ruta de asimilaci\u00f3n de nitrato y concretamente 45 de ellos parecen afectados en la se\u00f1alizaci\u00f3n positiva (ni, nitrato insensible). De estos mutantes ni, 5 tienen un fenotipo nit-, una nula expresi\u00f3n del reportero, y todos presentan la inserci\u00f3n del marcador en el gen regulador nit2 (en el cromosoma iii) (4). El resto de los mutantes ni (40) tienen fenotipo nit+ y presentan una baja actividad del reportero en respuesta a nitrato. Estos mutantes ni nit+ se han clasificado a su vez en tres grupos, atendiendo a los niveles de actividad ars en respuesta a nitrato: 1) muy insensibles a nitrato (ars inferior al 25%), 2) moderadamente insensible a nitrato (ars entre 25%-50%), y 3) nitrato sensibles (ars entre 50%-75%). la mayor\u00eda de los mutantes ni contienen una copia del dna etiqueta y se ha logrado identificar la regi\u00f3n gen\u00f3mica afectada en el genoma de chlamydomonas mediante la t\u00e9cnica resda-pcr (5) proponi\u00e9ndose una gran cantidad de loci que podr\u00edan estar implicados en la se\u00f1alizaci\u00f3n positiva por nitrato. se eligieron varios mutantes para su estudio m\u00e1s detallado. Se determinaron diferentes actividades como nr, nir, crecimiento en diferentes fuentes de nitr\u00f3geno y actividades de consumo de nitrato y nitrito en los mutantes nis pertenecientes al primer grupo. Se caracteriz\u00f3 fisiol\u00f3gica y molecularmente m\u00e1s a fondo la mutaci\u00f3n en dos mutantes nis y as\u00ed se ha podido dibujar un primer esquema de esta v\u00eda de se\u00f1alizaci\u00f3n. Se concluy\u00f3 que los genes para un posible inhibidor de ribonucleasa (5n2) y una prote\u00edna con dedos de zinc de uni\u00f3n a rna (znf) parecen tener un papel en la se\u00f1alizaci\u00f3n positiva,<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Aislamiento y caracterizacion de mutantes insercionales de chlamydomonas insensibles a la se\u00f1al positiva de nitrato<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Aislamiento y caracterizacion de mutantes insercionales de chlamydomonas insensibles a la se\u00f1al positiva de nitrato <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Jos\u00e9 Javier Higuera Sobrino <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 C\u00f3rdoba<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 05\/11\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Emilio Fernandez Reyes<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Mar\u00eda  teresa Roldan arjona <\/li>\n<li>rosa Mar\u00eda Le\u00f3n ba\u00f1ares (vocal)<\/li>\n<li>Jes\u00fas Jos\u00e9 Rexach benavides (vocal)<\/li>\n<li>Antonio  Jos\u00e9 M\u00e1rquez cabeza (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Jos\u00e9 Javier Higuera Sobrino La asimilaci\u00f3n de nitrato es la ruta m\u00e1s importante para la adquisici\u00f3n de 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