{"id":97331,"date":"2018-03-11T10:17:50","date_gmt":"2018-03-11T10:17:50","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-de-los-mecanismos-de-regulacion-que-operan-en-las-celulas-de-transferencia\/"},"modified":"2018-03-11T10:17:50","modified_gmt":"2018-03-11T10:17:50","slug":"estudio-de-los-mecanismos-de-regulacion-que-operan-en-las-celulas-de-transferencia","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/ingenieria-genetica\/estudio-de-los-mecanismos-de-regulacion-que-operan-en-las-celulas-de-transferencia\/","title":{"rendered":"Estudio de los mecanismos de regulaci\u00f3n que operan en las c\u00e9lulas de transferencia"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Diego Bergareche Nieto <\/strong><\/h2>\n<p>En el grano de ma\u00edz las c\u00e9lulas de transferencia se diferencian a partir de las c\u00e9lulas perif\u00e9ricas del endospermo en la base del grano, frente las terminales vasculares maternas. Su funci\u00f3n posiblemente sea facilitar la entrada de nutrientes durante el proceso de llenado del grano, para lo que desarrollan una serie de invaginaciones de la pared celular que incrementan la superficie destinada al transporte. Zmmrp-1 es un gen que codifica para un activador transcripcional espec\u00edfico de ct que se expresa durante todo el desarrollo de este tipo celular, alcanzando su pico de expresi\u00f3n cuando las c\u00e9lulas se est\u00e1n diferenciando m\u00e1s activamente. Adem\u00e1s, es capaz de transactivar distintos promotores espec\u00edficos de ct (meg1, betl-1, betl-1 y zmtcrr-1) y su expresi\u00f3n ect\u00f3pica en c\u00e9lulas epid\u00e9rmicas del endospermo es suficiente para modificar de manera temporal la identidad celular de este tejido hacia c\u00e9lulas de transferencia. Por todo ello zmmrp-1 est\u00e1 considerado como un gen clave en la diferenciaci\u00f3n de las ct. En esta tesis nos propusimos estudiar las rutas de regulaci\u00f3n y se\u00f1alizaci\u00f3n en el proceso de inducci\u00f3n y diferenciaci\u00f3n de las ct en el endospermo de ma\u00edz mediante la caracterizaci\u00f3n del sistema regulador que pivota en torno a zmmrp-1. Para diseccionar gen\u00e9ticamente las rutas responsables de la inducci\u00f3n de zmmrp-1 hemos empleado una colecci\u00f3n de arabidopsis con la construcci\u00f3n zmmrpprom:gus mutagenizada con ems. El screening de la colecci\u00f3n mediante tinci\u00f3n histoqu\u00edmica gus de pl\u00e1ntulas de 7 d\u00edas tras la germinaci\u00f3n nos llev\u00f3 a identificar 6 l\u00edneas mutantes recesivas no al\u00e9licas con una expresi\u00f3n gus alterada. De las 6 l\u00edneas identificadas solamente 2, m-12 y m-630, presentan un fenotipo estable. M-12 presenta una expresi\u00f3n ect\u00f3pica de gus en la parte a\u00e9rea de la pl\u00e1ntula y una mayor tasa de crecimiento respecto plantas silvestres mientras que la l\u00ednea m-630, en la que hay un brusco descenso e la expresi\u00f3n de gus en pl\u00e1ntula, tiene un crecimiento ralentizado que afecta a todo el desarrollo y un mayor n\u00famero de abortos respecto plantas zmmrpprom:gus silvestres. El cartografiado fino de la mutaci\u00f3n en la l\u00ednea m-12 mediante el an\u00e1lisis de una poblaci\u00f3n de mapa de 1416 individuos nos ha permitido localizar la mutaci\u00f3n en un intervalo de 131 kb, con 35 genes, en el brazo largo del cromosoma 1 (at1g79120-at1g79470). En el caso de la l\u00ednea m-630, la mutaci\u00f3n causal est\u00e1 ligada al marcador ciw12 en el brazo corto del cromosoma 1. Puesto que el promotor de zmmrp-1 responde a az\u00facares y que la inactivaci\u00f3n en ma\u00edz de cwi2, una invertasa de pared celular espec\u00edfica de ct, afecta seriamente el proceso de llenado del grano quisimos estudiar el efecto de la actividad invertasa de pared celular sobre la inducci\u00f3n del promotor de zmmrp-1. Para ello analizamos la actividad del promotor de zmmrp-1 en l\u00edneas zmmrpprom:gus de arabidopsis con la actividad invertasa de pared celular alterada. Los resultados indican que el incremento de los niveles de sacarosa, como resultado de una dr\u00e1stica reducci\u00f3n de la actividad invertasa de pared, tiene un efecto inductor sobre la actividad del promotor de zmmrp-1 en las c\u00e9lulas de transferencia de esas plantas. Para diseccionar funcionalmente el promotor de zmmrp-1 realizamos experimentos de expresi\u00f3n transitoria con deleciones seriadas del promotor en las ct que se desarrollan en los cotiledones de vicia faba. Los resultados indican que las regiones promotoras comprendidas entre -420\/-241 y 136\/-85 son importante para la expresi\u00f3n del promotor en ct. Ambas regiones comparten una secuencia de 8 pb (aaagatt) en la que solapan motivos a los que se unen reguladores de respuesta tipo b en arabidopsis, factores transcripcionales dof en el endospermo de ma\u00edz y un motivo que se localiza en promotores que se activan espec\u00edficamente en tejidos vegetales que contienen c\u00e9lulas con morfolog\u00eda de c\u00e9lulas de transferencia, situados en la frontera entre organismos simbi\u00f3ticos. Con el prop\u00f3sito de identificar genes con capacidad de regular transcripcionalmente a zmmrp-1 realizamos un experimento de one hybrid utilizando la regi\u00f3n -420\/-241 de su promotor como anzuelo. Identificamos una factor transcripcional tipo myb que se une, probablemente, a la secuencia consenso yaac(g\/t)g a la que se unen factores transcripcionales tipo myb y que encontramos en el fragmento promotor utilizado. Adem\u00e1s, hemos identificado, mediante ensayos de two hybrid en levadura, prote\u00ednas candidatas a interaccionar con zmmrp-1 y zmtcrr-1 a la espera de ser confirmadas en otros sistemas.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio de los mecanismos de regulaci\u00f3n que operan en las c\u00e9lulas de transferencia<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio de los mecanismos de regulaci\u00f3n que operan en las c\u00e9lulas de transferencia <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Diego Bergareche Nieto <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Alcal\u00e1<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 20\/11\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Gregorio Hueros Soto<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jes\u00fas Vicente carbajosa <\/li>\n<li>Mar\u00eda rosa Ponce molet (vocal)<\/li>\n<li>pedro Revilla temi\u00f1o (vocal)<\/li>\n<li>jordi Garc\u00eda mas (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Diego Bergareche Nieto En el grano de ma\u00edz las c\u00e9lulas de transferencia se diferencian a partir de 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