{"id":97504,"date":"2018-03-11T10:18:03","date_gmt":"2018-03-11T10:18:03","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/degradacion-de-compuestos-aromaticos-en-rhodococcus-sp-estirpe-tfb\/"},"modified":"2018-03-11T10:18:03","modified_gmt":"2018-03-11T10:18:03","slug":"degradacion-de-compuestos-aromaticos-en-rhodococcus-sp-estirpe-tfb","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/hidrocarburos-aromaticos\/degradacion-de-compuestos-aromaticos-en-rhodococcus-sp-estirpe-tfb\/","title":{"rendered":"Degradaci\u00f3n de compuestos arom\u00e1ticos en rhodococcus sp. estirpe tfb"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Laura Tom\u00e1s Gallardo <\/strong><\/h2>\n<p>El proyecto de tesis denominado degradaci\u00f3n de compuestos arom\u00e1ticos en rhodococcus sp. Estirpe tfb presentado por la doctoranda d\u00f1a. Laura tom\u00e1s gallardo ha sido realizado en el \u00e1rea de microbiolog\u00eda perteneciente al departamento de biolog\u00eda molecular e ingenier\u00eda bioqu\u00edmica de la universidad pablo de olavide. el proyecto de tesis consta de cuatro bloques de resultados. En el primer bloque se ha realizado la caracterizaci\u00f3n taxon\u00f3mica y fisiol\u00f3gica de una nueva estirpe bacteriana aislada de los fangos del r\u00edo rhin (alemania) que se ha adscrito al g\u00e9nero rhodococcus y se la ha denominado rhodococcus sp. Estirpe tfb (tom\u00e1s-gallardo et al., 2006). Una de las caracter\u00edsticas m\u00e1s importantes de la estirpe tfb es su capacidad de metabolizar multitud de compuestos arom\u00e1ticos como fuente de carbono y energ\u00eda. En los siguientes bloques de resultados se han descrito las rutas de degradaci\u00f3n de los tres compuestos arom\u00e1ticos seleccionados; ftalato, tetralina y naftaleno. Para la caracterizaci\u00f3n de la degradaci\u00f3n de estos compuestos se ha empleado una aproximaci\u00f3n prote\u00f3mica, poniendose a punto la metodolog\u00eda 2d-dige (ge healthcare) para comparar el proteoma de la bacteria en diferentes condiciones de cultivo. Gracias a esta comparaci\u00f3n se han identificado una serie de enzimas implicadas en la degradaci\u00f3n de los diferentes compuestos, pudi\u00e9ndose incluso caracterizar fen\u00f3menos de regulaci\u00f3n de la expresi\u00f3n de las distintas enzimas. en la caracterizaci\u00f3n de la degradaci\u00f3n de ftalato se identificaron 13 prote\u00ednas similares a enzimas implicadas en el metabolismo de este compuesto monoar\u00f3matico hasta intermediarios del metabolismo central, entre otras. Gracias al an\u00e1lisis prote\u00f3mico se ha clonado un oper\u00f3n de genes cuyos productos son similares a las enzimas de degradaci\u00f3n de ftalato hasta protocatecuato identificadas mediante el an\u00e1lisis prote\u00f3mico, a los que denominamos genes pht. Para completar la caracterizaci\u00f3n se realiz\u00f3 el an\u00e1lisis de expresi\u00f3n por rt-pcr de los genes pht, adem\u00e1s de la cuantificaci\u00f3n de dos actividades enzim\u00e1ticas que forman parte de la ruta de degradaci\u00f3n, seg\u00fan la bibliograf\u00eda consultada. Con los resultados obtenidos se ha podido proponer una ruta de degradaci\u00f3n completa para el ftalato. la caracterizaci\u00f3n de la degradaci\u00f3n de tetralina se abord\u00f3 de forma similar. Con el an\u00e1lisis prote\u00f3mico se identificaron 17 prote\u00ednas similares a enzimas descritas previamente como implicadas en la degradaci\u00f3n de este compuesto hasta intermediarios del metabolismo central en otra estirpe bacteriana, sphingomonas macrogolitabida estirpe tfa. Adem\u00e1s, se ha secuenciado un fragmento de 23 kb que contiene todos los genes necesarios para degradar esta mol\u00e9cula (genes thn), as\u00ed como los genes implicados en la regulaci\u00f3n transcripcional de los genes thn. Se ha caracterizado la actividad enzim\u00e1tica del producto del gen thnd y se ha demostrado su implicaci\u00f3n en la degradaci\u00f3n de tetralina. La expresi\u00f3n de los genes thn se ha analizado mediante rt-pcr, q-rt-pcr y con fusiones traduccionales a gfp. Adem\u00e1s, se han determinado los inicios de la transcripci\u00f3n tanto de los genes estructurales como de los genes reguladores y se ha realizado un estudio de mutantes en la regi\u00f3n promotora de los genes estructurales para caracterizar las regiones de adn implicadas en la activaci\u00f3n de estos genes y en la represi\u00f3n catab\u00f3lica de los mismos. Con los resultados obtenidos se ha podido proponer una ruta de degradaci\u00f3n completa para la tetralina adem\u00e1s de sentar las bases del estudio de los mecanismos de regulaci\u00f3n transcripcional que gobiernan la expresi\u00f3n de los genes thn. la degradaci\u00f3n de naftaleno tambi\u00e9n se abord\u00f3 de la misma forma que el ftalato y la tetralina. El resultado del an\u00e1lisis prote\u00f3mico mostr\u00f3 que las prote\u00ednas thn tambi\u00e9n est\u00e1n presentes en el proteoma de la estirpe tfb cuando crece con naftaleno como fuente de carbono y energ\u00eda. Sin embargo, s\u00f3lo las tres primeras enzimas de la ruta de degradaci\u00f3n de tetralina podr\u00edan tener actividad sobre el naftaleno y sus intermediarios, seg\u00fan se ha visto en estudios previos realizados con las enzimas thn de la estirpe tfa. Otras prote\u00ednas identificadas mostraron que la degradaci\u00f3n de naftaleno ocurre siguiendo las rutas del salicilato y gentisato previamente descritas en otras especies bacterianas, aunque a\u00fan no se han podido clonar los genes que codificar\u00edan para las enzimas identificadas en el an\u00e1lisis prote\u00f3mico. durante el desarrollo de este proyecto de tesis se ha realizado una estancia con fines cient\u00edficos en el laboratorio del dr. Schlomann (freiberg, alemania) durante la que se determin\u00f3 que la estirpe tfb posee dos pl\u00e1smidos lineales, ptfb1 y ptfb2, de 1100 y 450 kb respectivamente, y se ha determinado que tanto los genes thn como los genes pht se encuentran localizados en el pl\u00e1smido ptfb1.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Degradaci\u00f3n de compuestos arom\u00e1ticos en rhodococcus sp. estirpe tfb<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Degradaci\u00f3n de compuestos arom\u00e1ticos en rhodococcus sp. estirpe tfb <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Laura Tom\u00e1s Gallardo <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Pablo de olavide<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 27\/11\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Eduardo Santero Santurino<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: paloma Liras pad\u00edn <\/li>\n<li>Juan  Antonio Lopez del olmo (vocal)<\/li>\n<li>Juli\u00e1n Perera gonzalez (vocal)<\/li>\n<li>Juan  Luis Ramos martin (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Laura Tom\u00e1s Gallardo El proyecto de tesis denominado degradaci\u00f3n de compuestos arom\u00e1ticos en rhodococcus sp. 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