{"id":97573,"date":"2018-03-11T10:18:07","date_gmt":"2018-03-11T10:18:07","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/cultivos-primarios-de-osteoblastos-humanos-sistema-opg-rankl-efecto-de-esta%c2%admulos-hormonales-y-farmacos-antiresortivos\/"},"modified":"2018-03-11T10:18:07","modified_gmt":"2018-03-11T10:18:07","slug":"cultivos-primarios-de-osteoblastos-humanos-sistema-opg-rankl-efecto-de-esta%c2%admulos-hormonales-y-farmacos-antiresortivos","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica-molecular\/cultivos-primarios-de-osteoblastos-humanos-sistema-opg-rankl-efecto-de-esta%c2%admulos-hormonales-y-farmacos-antiresortivos\/","title":{"rendered":"Cultivos primarios de osteoblastos humanos. sistema opg\/rankl. efecto de est\u00edmulos hormonales y f\u00e1rmacos antiresortivos"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mar\u00eda Jos\u00e9 Rios Moreno <\/strong><\/h2>\n<p>El sistema opg\/ rankl modula el remodelado \u00f3seo. Hormonas como los estr\u00f3genos y la vitamina d pueden influir en el remodelado \u00f3seo a trav\u00e9s de receptores osteobl\u00e1sticos.  El alendronato y el raloxifeno son efectivos  f\u00e1rmacos antirresortivos en la enfermedad osteopor\u00f3tica. Reducen el riesgo de fractura, el remodelado \u00f3seo y aumentan la densidad mineral \u00f3sea. No se sabe si se puede ejercer un efecto directo en los osteoblastos a trav\u00e9s del  sistema opg\/ rankl. Los objetivos de este estudio son: 1. Analizar la secreci\u00f3n de opg  y la expresi\u00f3n gen\u00e9tica de opg y rankl en cultivos primarios de osteoblastos (hob) de pacientes con osteoporosis y comparar los resultados con personas sin osteoporosis.2. Evaluar la influencia de los est\u00edmulos hormonales 17-\u00edY-estradiol (e2) y 1.25\u00c2\u00bf(oh)2d3 (vd3)  sobre la secreci\u00f3n de opg y  la expresi\u00f3n de opg y rankl en cultivos de hob de ambos grupos de estudio. Comparar la influencia de los est\u00edmulos sobre el sistema opg\/rankl de osteoblastos de pacientes osteopor\u00f3tico y no osteopor\u00f3ticos. 3. Evaluar la influencia de los f\u00e1rmacos antiresortivos alendronato (ale) y raloxifeno (rx) sobre la secreci\u00f3n de opg y sobre la expresi\u00f3n de opg y rankl en cultivos de hob. Comparar la influencia de los est\u00edmulos sobre el sistema opg\/rankl de hueso osteopor\u00f3tico y no osteopor\u00f3tico. para ello hemos establecido cultivos primarios de hob de 39 pacientes (9 hombres y 30 mujeres), con edades comprendidas entre 63 y 92 a\u00f1os. De estos, 18 proced\u00edan de pacientes con oa (4 hombres y 14 mujeres) y 21 (5 hombres, 16 mujeres) de pacientes con fractura osteopor\u00f3tica. los pacientes op eran mayores (82\u00c2\u00b1 7 a\u00f1os) que los pacientes oa (74 \u00c2\u00b1 6 a\u00f1os). En el grupo oa la edad media de hombres y mujeres fue comparable (hombres, 71 \u00c2\u00b1 4 a\u00f1os v.S mujeres, 73 \u00c2\u00b1 7 a\u00f1os). En cambio en el grupo de pacientes op la edad media  de las mujeres fue mayor que la de los hombres (hombres, 74 \u00c2\u00b1 11 a\u00f1os v.S mujeres, 84 \u00c2\u00b1 6 a\u00f1os, p = 0.037). Si comparamos las edades entre un mismo grupo de estudio, las mujeres op son mayores que las oa (oa, 73 \u00c2\u00b1 7 a\u00f1os v.S op, 84 \u00c2\u00b1 6 a\u00f1os, p = 0.037), mientras que los hombres presentan edades comparables (oa, 71 \u00c2\u00b1 4 a\u00f1os v.S op, 74 \u00c2\u00b1 11 a\u00f1os). la proliferaci\u00f3n de los cultivos de hob procedentes de pacientes op fue m\u00e1s lenta que la de los del grupo oa, siendo mayor el tiempo necesario para llegar a la confluencia celular (31  \u00c2\u00b1 2 d\u00edas v.S. 20.4 \u00c2\u00b1 1,1 d\u00edas, p \u00c2\u00bf  0,05, respectivamente).En los grupos de estudio tanto en oa como en op, el tiempo de confluencia fue similar entre hombres y mujeres. Sin embargo, si comparamos el tiempo de confluencia de mujeres  op y oa result\u00f3 m\u00e1s elevado en las primeras  (32 \u00c2\u00b1  15 d\u00edas v.S 22 \u00c2\u00b1 2 d\u00edas, respectivamente, p = 0,001), al igual que ocurri\u00f3 en hombres (26 \u00c2\u00b1  2.75 d\u00edas v.S. 17 \u00c2\u00b1 1.5 d\u00edas,  respectivamente, p = 0,032). El tiempo de confluencia del primer pase se correlacion\u00f3 positivamente con la edad (r = 0.32, p = 0.05). Dado que los pacientes op eran de mayor edad, ajustamos el tiempo de confluencia celular por esta variable  y comprobamos que permanec\u00eda siendo m\u00e1s prolongado en el grupo op (op: 30 d\u00edas  (ci 95% 26.5-33.5); oa: 20.7 d\u00edas (ci 95% 17.1-24.3,  p \u00c2\u00bf 0.001).  tras el segundo pase, el crecimiento fue similar entre ambos grupos  (oa: 5,9 \u00c2\u00b1 3,5 d\u00edas v.S. Op: 6,6 \u00c2\u00b1  2,8 d\u00edas).   Del mismo modo, este segundo tiempo de confluencia result\u00f3 ser comparable  entre hombres y mujeres  dentro de un mismo grupo  oa ( hombres: 7 \u00c2\u00b1  1 v.S. Mujeres: 6 \u00c2\u00b1 2 d\u00edas) op ( hombres:  5 \u00c2\u00b1  0.5 d\u00edas v.S. Mujeres : 7 \u00c2\u00b1  1 d\u00edas ) y equivalentes entre mujeres de distinto grupo ( oa: 6 \u00c2\u00b1  2  d\u00edas v.S. Op:7 \u00c2\u00b1  1 d\u00edas) y hombres de distinto grupo ( oa: 7 \u00c2\u00b1 1 d\u00edas v.S. Op: 5\u00c2\u00b1  0.5 d\u00edas). el \u00edndice de masa corporal (imc) fue menor en pacientes op (28,06 \u00c2\u00b1  4,9) que en el grupo oa (33,9 \u00c2\u00b1  0,94) (p\u00c2\u00bf 0,05). Sin embargo, no existe correlaci\u00f3n entre imc y el tiempo de confluencia celular. valoramos la secreci\u00f3n de opg, mediante t\u00e9cnica de elisa, en los medios recogidos de  los cultivos estimulados con e2 y 1.25d. los niveles basales de secreci\u00f3n de opg fueron un 90 % m\u00e1s altos en el grupo op (7,7 \u00c2\u00b1 1 pmol\/l) que los encontrados en el grupo oa (4,1 \u00c2\u00b1  0,7 pmol\/l), diferencia que alcanz\u00f3 significaci\u00f3n estad\u00edstica (p\u00c2\u00bf 0.05). La secreci\u00f3n de opg entre hombres y mujeres en los dos grupos result\u00f3 ser  similar (oa; hombres: 3,6 \u00c2\u00b1  0,72 v.S. Mujeres: 4,36 \u00c2\u00b1  0,86 pmol\/l), (op; hombres: 5,69 \u00c2\u00b1  1,39 v.S mujeres; 7,79 \u00c2\u00b1  1,15  pmol\/l). Los niveles de secreci\u00f3n de opg de cultivos de hob de mujeres op ( 7, 79 \u00c2\u00b1  1,15 pmol\/l ) fue un 79% mayor que los de mujeres oa (4,36 \u00c2\u00b1  0,86 pmol\/l, p = 0,025 ) del mismo modo encontramos niveles  m\u00e1s altos de secreci\u00f3n de opg  &#8211; un aumento del 58% &#8211; en cultivos de hob de hombres op ( 5,69 \u00c2\u00b1 1,39 pmol\/l) que en cultivos de pacientes oa  ( 3,6 \u00c2\u00b1  0,72  pmol\/l,  p=0.037 )  el tratamiento con e2 y 1.25d o e2+1.25d no modific\u00f3 los niveles de secreci\u00f3n de opg en ninguno de los dos grupos de estudio. Tras la estimulaci\u00f3n con e2 y 1.25d o e2+1.25d los niveles se secreci\u00f3n de opg segu\u00edan manteni\u00e9ndose significativamente superior en cultivos de hob de pacientes op respecto a los de oa en todas las condiciones analizadas (p\u00c2\u00bf 0.05).  analizamos la expresi\u00f3n g\u00e9nica de opg y rankl mediante rt-pcr semicuantitativa. Los valores obtenidos fueron normalizados con la expresi\u00f3n g\u00e9nica de -actina. Los valores absolutos son expresados como media\u00c2\u00b1es u.R. Y las modificaciones inducidas por los distintos est\u00edmulos como cambios porcentuales del valor basal. la expresi\u00f3n de opg de los cultivos de hob fue comparable entre los dos grupos de estudio (op: 0.95 \u00c2\u00b1 0.09 u.R; oa: 0.93 \u00c2\u00b1 0.07 u.R). La estimulaci\u00f3n celular con e2, 1.25d o e2+1.25d no provoco ning\u00fan cambio aparente. la expresi\u00f3n de rankl basal fue similar entre ambos grupos de estudio (op: 0.30 \u00c2\u00b1 0.06 u.R; oa: 0.32 \u00c2\u00b1 0.08 u.R). En el grupo op, hubo un incremento significativo, por encima del 200% en repuesta a  1,25d (129 %, p = 0.004)  y a e2+1,25d (152 %, p = 0.027). Sin embargo, en el grupo oa no hubo respuesta  a e2 y mostr\u00f3 un ligero aumento aunque no significativo a 1,25d (78 %) y e2+1,25d (122 %) . el cociente rankl\/ opg se calcul\u00f3 dividiendo los valores absolutos de la expresi\u00f3n molecular de cada paciente. Para cada grupo se muestran los valores medios y el error est\u00e1ndar de arnm de rankl \/ opg, de todos los pacientes. Tomamos los valores medios de la situaci\u00f3n basal como el 100 % y las modificaciones debidas a los distintos est\u00edmulos la expresamos como un cambio porcentual de la misma. la ratio de la expresi\u00f3n de rankl\/opg  en cultivos de hob de pacientes op fue mayor tanto basalmente (op: 0.42 \u00c2\u00b1 0.12 u.R; oa: 0.32 \u00c2\u00b1 0.06 u.R) como en todas las condiciones experimentales estudiadas. Tras la estimulaci\u00f3n con 1,25d y e2+1,25d  hubo un incremento algo mayor del 150% en el grupo op (p = 0,004 y p = 0,008 respectivamente). Al igual que lo que suced\u00eda con la expresi\u00f3n de rankl, la presencia de e2 en el medio de cultivo no modifico el ratio rankl\/opg. En el grupo oa, no hubo cambios del cociente  rankl\/opg en ninguna de las condiciones analizadas  no hubo relaci\u00f3n entre los niveles de secreci\u00f3n de opg, de arnm de opg y rankl, ni tampoco entre estos genes y la confluencia celular o la edad de los pacientes en ninguno de los grupos estudiados. \t en este estudio evaluamos la influencia del alendronato (ale) y el raloxifeno (rx) en la expresi\u00f3n gen\u00e9tica de las citoquinas rankl, opg,  y la secreci\u00f3n proteica de opg en cultivos de hob  procedentes tanto de pacientes oa como de pacientes op y comparamos a su vez el efecto de estos f\u00e1rmacos antireabsortivos entre ambos grupos de estudio. \testudiamos la secreci\u00f3n de opg, mediante t\u00e9cnica de elisa,  en los medios recogidos de los cultivos estimulados con ale y rx.  el tratamiento con ale y rx no produjo cambios en los niveles de secreci\u00f3n de opg en ninguno de los grupos estudiados. \tdeterminamos la expresi\u00f3n de arnm de opg y rankl mediante rt-pcr semicuantitativa. Los valores obtenidos fueron normalizados con la expresi\u00f3n de arnm de -actina. Los resultados son expresados en tanto por ciento respecto a la condici\u00f3n basal de cada grupo. \tal analizar la expresi\u00f3n de arnm de opg, en cada grupo individualmente, observamos que el grupo de cultivos de hob de pacientes op present\u00f3 aumentos superiores tras los distintos tratamientos, respecto al grupo oa. En el grupo op, con ale el aumento fue muy discreto, de s\u00f3lo el 10%, sin embargo, lleg\u00f3 a ser  significativo tras ser tratado con rx ( 35 %, p= 0.038). Entre el grupo op y oa no encontramos diferencias significativas en las distintas condiciones de estudio. \tla expresi\u00f3n de arnm de  rankl result\u00f3 ser mayor tras los tratamientos con ale y rx en el grupo op respecto al oa. En los cultivos de pacientes op tratados con rx el aumento fue del 60 % (p = 0 .013) y en los tratados con ale del 118% (p = 0.05). Los cambios observados en el grupo oa fueron menores y no llegaron a ser significativos, respecto al valor basal.  no hubo correlaci\u00f3n entre los niveles de secreci\u00f3n de opg, ni de arnm de opg, ni de arnm de rankl y tampoco entre el tiempo de confluencia celular, ni en la edad de los pacientes en ninguno de los grupos estudiados. el cociente rankl\/ opg se calcul\u00f3 dividiendo los valores absolutos de la expresi\u00f3n molecular de cada paciente. Para cada grupo se muestran los valores medios y el error est\u00e1ndar de arnm de rankl\/opg, de todos los pacientes. Tomamos los valores medios de la situaci\u00f3n basal como el 100 % y las modificaciones debidas a los distintos est\u00edmulos la expresamos como un cambio porcentual de la misma. la ratio de la expresi\u00f3n de arnm de rankl\/opg en cultivos de hob de pacientes op fue mayor que la de los pacientes oa en todas las condiciones analizadas, llegando a ser significativa tras el tratamiento con rx (p = 0.02). Tras los est\u00edmulos con ale y rx hubo un incremento del 112% y del 60% en el grupo op (p = 0.048 y p = 0.017). Sin embargo, en los cultivos de hob de pacientes oa pr\u00e1cticamente no se vio modificada por ninguna de las condiciones. en resumen, en nuestro estudio demostramos que los hob en cultivo de pacientes con fractura de cadera confluyen m\u00e1s lentamente que los de pacientes con oa y producen mayor secreci\u00f3n proteica de opg en todas las condiciones del cultivo que hemos experimentado. La adicci\u00f3n de 1,25d, 1,25d + e2, ale y rx al cultivo incrementa significativamente  la expresi\u00f3n g\u00e9nica de rankl y la ratio rankl\/opg, adem\u00e1s de opg, para el caso de rx, en los hob de pacientes op, hecho que no se comprueba para los pacientes con oa. Estos resultados demuestran que estas hormonas y f\u00e1rmacos antireabsortivos, ejercen una acci\u00f3n directa sobre el osteoblasto, un efecto m\u00e1s marcado en situaciones de alteraci\u00f3n del remodelado \u00f3seo, como es la enfermedad osteopor\u00f3tica y, por \u00faltimo, una capacidad moduladora sobre el sistema de intercomunicaci\u00f3n de osteoblasto y osteoclasto opg\/rankl que, en \u00faltima instancia, es el responsable de regular la actividad de remodelado \u00f3seo.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Cultivos primarios de osteoblastos humanos. sistema opg\/rankl. efecto de est\u00edmulos hormonales y f\u00e1rmacos antiresortivos<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Cultivos primarios de osteoblastos humanos. sistema opg\/rankl. efecto de est\u00edmulos hormonales y f\u00e1rmacos antiresortivos <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda Jos\u00e9 Rios Moreno <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Sevilla<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 27\/11\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Ramon Perez Cano<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: federico Hawkins carranza <\/li>\n<li>M\u00aa \u00e1ngeles V\u00e1zquez g\u00e1mez (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 Luis Torrella l\u00f3pez (vocal)<\/li>\n<li>rosa Mar\u00eda Moruno Garc\u00eda (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Mar\u00eda Jos\u00e9 Rios Moreno El sistema opg\/ rankl modula el remodelado \u00f3seo. 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