{"id":97579,"date":"2018-03-11T10:18:07","date_gmt":"2018-03-11T10:18:07","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/obtencion-de-un-microorganismo-productor-de-quimosina-de-bufalo-con-aplicabilidad-biotecnologica\/"},"modified":"2018-03-11T10:18:07","modified_gmt":"2018-03-11T10:18:07","slug":"obtencion-de-un-microorganismo-productor-de-quimosina-de-bufalo-con-aplicabilidad-biotecnologica","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/santiago-de-compostela\/obtencion-de-un-microorganismo-productor-de-quimosina-de-bufalo-con-aplicabilidad-biotecnologica\/","title":{"rendered":"Obtenci\u00f3n de un microorganismo productor de quimosina de b\u00fafalo con aplicabilidad biotecnol\u00f3gica"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Juan  Andr\u00e9s Vallejo Vidal <\/strong><\/h2>\n<p>Introducci\u00f3n las proteasas son enzimas capaces de catalizar la ruptura de enlaces pept\u00eddicos. Las aplicaciones de las proteasas en la industria alimentaria junto con su vasta diversidad y su amplio rango de acci\u00f3n han atra\u00eddo la atenci\u00f3n de los biotecn\u00f3logos en todo el mundo. Aunque est\u00e1n ampliamente distribuidas en la naturaleza, los microorganismos son la fuente preferente de estos enzimas para llevar a cabo bioprocesos de fermentaci\u00f3n, debido a su bajo coste de producci\u00f3n, a su alta tasa de crecimiento y tambi\u00e9n por ser susceptibles de manipulaci\u00f3n gen\u00e9tica lo cual permite la mejora de su producci\u00f3n enzim\u00e1tica o la posibilidad de modificar los enzimas que producen para obtener nuevas y mejores actividades (mala rao et al., 1998; north, 1982). Entre la gran cantidad de proteasas con aplicaci\u00f3n en la industria alimentaria se encuentran las proteasas asp\u00e1rticas, empleadas tradicionalmente para la elaboraci\u00f3n de masas queseras. estas proteasas, presentan dos residuos de acido asp\u00e1rtico y una conformaci\u00f3n tridimensional bilobulada, caracter\u00edsticas que les confieren su capacidad para actuar espec\u00edficamente sobre el enlace phe105-met106 presente en la casein de la leche, originando la coagulaci\u00f3n de la leche (mcmahon et al., 1984), las proteasas asp\u00e1rticas se pueden dividir en dos grandes grupos: proteasas tipo pepsina, que, adem\u00e1s de las pepsinas animales incluyen las f\u00fangicas producidas por especies de los g\u00e9neros aspergillus, penicillium, rhizopus o neurospora y proteasas tipo renina encuadradas dentro del grupo e.C.3.4.23.4. Este \u00faltimo grupo de las reninas es el m\u00e1s solicitado por originar masas queseras id\u00f3neas. En la actualidad, existen tres fuentes principales de reninas empleadas en la industria quesera. En primer lugar las reninas animales tales como las quimosinas (ec. 3. 4. 23. 4), extra\u00eddas tradicionalmente a partir del prensado directo de cuajares de terneros lechales. En segundo lugar las reninas microbianas, obtenidas mediante la extracci\u00f3n de sobrenadantes de cultivos de endothia o mucor y, por \u00faltimo, las reninas obtenidas mediante ingenier\u00eda gen\u00e9tica. en general, la incapacidad de las quimosinas animales para cubrir las demandas actuales de cuajo en la industria quesera, ha conducido a un aumento del inter\u00e9s por las reninas microbianas y las recombinantes. Una gran variedad de bacterias y hongos han sido descritas como productoras de enzimas microbianos capaces de coagular la leche originando masas queseras, como los g\u00e9neros alcaligenes, bacillus, corynebacterium, lactobacillus, pseudomonas, serratia, streptococcus o streptomyces, aspergillus (reichard, 1995), candida (monod, 1994), coriolus, endothia, enthomophtora, irpex, mucor, penicillium (gente et al., 1997), rhizopus, sclerotium, torulopsis (yu, 1994), saccharomyces cerevisiae (egel-mitani et al., 1989) y phaffia (bang et al., 1999). Sin embargo, s\u00f3lo dos de estos dos g\u00e9neros se usan en la actualidad en la industria; mucor (sternberg, 1972; gagnaire et al., 2001) y endothia (gray et al., 1986; dickinson et al., 1987). En general, muchas proteasas asp\u00e1rticas de origen microbiano se han introducido en el mercado pero sin \u00e9xito (yu, 1994). diversos genes de proteasas asp\u00e1rticas de bacterias y hongos han sido expresados en otros microorganismos. As\u00ed, gray et al., (1986), expresan una proteasa asp\u00e1rtica de m. miehei en e. Coli y aspergillus nidulans. M\u00e1s tarde, dickinson et al., (1987), introdujeron un gen de una proteasa asp\u00e1rtica de mucor miehei en mucor circinelloides. lin et al., (1993), clonaron y expresaron un gen de una proteasa asp\u00e1rtica de candida tropicalis en e. Coli. Y reichard et al., (2000), expresaron un gen de una proteasa 2 asp\u00e1rtica de aspergillus fumigatus en p. Pastoris. Incluso, existen trabajos que describen la clonaci\u00f3n de proteasas asp\u00e1rticas de plantas en microorganismos (cordeiro et al., 1994), como la clonaci\u00f3n de la ciprosina de cynara cardunculus en p. Pastoris (white et al., 1999). en 1982, harris et al. And moir et al., Secuencian y clonan la preproquimosina, de origen animal. M\u00e1s tarde, la quimosina animal se clon\u00f3 y expres\u00f3 con \u00e9xito en e. Coli (nishimori et al., 1982; emtage et al., 1983; zhang et al., 1991) y, m\u00e1s adelante, en levaduras como saccharomyces (mellor et al., 1983; goff et al., 1984; smith et al., 1985), klyveromyces (van der berg et al., 1990; geoffroy et al., 1990) \u00f3 yarrowia (franke et al., 1988), as\u00ed como en ciertas especies de bacillus (parente et al., 1991; hayashi et al., 1995), aspergillus (cullen et al., 1987; tschiya et al., 1993) \u00f3 trichoderma (harkki et al., 1989). es en 1988 cuando, genencor, introduce por primera vez en el mercado cuajo obtenido a partir de un cepa recombinante de e. Coli portadora del gen de la quimosina del ternero, m\u00e1s tarde clonado y expresado con \u00e9xito en levaduras. Esto represent\u00f3 el primer eslab\u00f3n de una cadena que, seg\u00fan los expertos en biotecnolog\u00eda, tiene como finalidad reemplazar paulatinamente el cuajo animal por el obtenido a partir de microorganismos recombinantes (green, 1985; hicks et al., 1988). tras varios a\u00f1os de estudios relacionados con este tema (poza et al., 2003; poza et al., 2004), los cuales originaron una serie de microorganismos recombinantes portadores de genes de proteasas asp\u00e1rticas de origen microbiano, nos planteamos clonar el gen de la quimosina del b\u00fafalo (bubalus arnee bubalis). Las razones de este planteamiento son: 1. La necesidad de buscar nuevas fuentes de producci\u00f3n de cuajo. 2. El b\u00fafalo contiene en su genoma un gen altamente homologo (97 %) al de la quimosina del ternero y, adem\u00e1s, el solapamiento de ambas prote\u00ednas en base a su estructura tridimensional muestra un elevado grado de similitud, no encontr\u00e1ndose diferencias conformacionales entre los centros activos (spdviewer). 3. La quimosina del ternero ha sido clonada anteriormente con \u00e9xito en bacterias y levaduras, obteni\u00e9ndose la cepa recombinante de e. Coli que actualmente se emplea en la industria quesera. 4. El gen de la quimosina ha demostrado mayor eficacia en la industria quesera que cualquier otra proteasa asp\u00e1rtica microbiana o f\u00fangica, de ah\u00ed que s\u00f3lo se haya comercializado con \u00e9xito una cepa recombinante; una cepa de e. Coli que contiene el gen de la quimosina bovina. las granjas de b\u00fafalo est\u00e1n prosperando en la actualidad por ser las hembras capaces de producir un tipo de leche ideal para elaborar queso mozzarella. Sin embargo, la quimosina del b\u00fafalo, de 36 kda, no ha sido explotada industrialmente para elaborar queso (mohanty et al., 2003; malak et al., 1996), aunque el gen de la quimosina del b\u00fafalo (bubalus arnee bubalis) ha sido aislado y secuenciado. Este gen se encuentra en el genbank y su n\u00famero de acceso es; af177290. Este gen guarda una homolog\u00eda del 97 % con el gen de la quimosina de bos taurus. Esto permite dise\u00f1ar parejas de oligonucle\u00f3tidos a partir de ambas secuencias para llevar a cabo la amplificaci\u00f3n del gen que se va a clonar. 3 se propuso, por tanto, aislar el gen de la quimosina de bubalus arnee bubalis (b\u00fafalo), a partir de la extracci\u00f3n de mrna del cuajar de un individuo lechal, utilizando un sistema de rt-pcr. El gen obtenido fue clonado y expresado en e. Coli, bas\u00e1ndonos en anteriores estudios. Y, dado el \u00e9xito alcanzado en numerosas ocasiones en la expresi\u00f3n de prote\u00ednas heter\u00f3logas en levaduras, tales como saccharomyces cerevisiae o pichia pastoris (sreekrishna, 1997; cereghino et al., 2002; brouta et al., 2002; waterham et al., 1997; reichard et al., 2000; white et al., 1999; goff et al., 1984; mellor et al., 1983), se realiz\u00f3 la clonaci\u00f3n posterior del gen en estos microorganismos, con el fin de obtener finalmente una levadura recombinante productora de cuajo, capaz de competir con los productos que actualmente oferta la industria quesera. objetivos objetivo 1; aislamiento del gen de la quimosina de bubalus arnee bubalis. extracci\u00f3n del cuajar del b\u00fafalo . el b\u00fafalo macho debe haber sido alimentado exclusivamente con leche materna, durante 15 d\u00edas. Inmediatamente despu\u00e9s de la matanza se extrajo el cuajar que fue troceado y congelado a -80\u00c2\u00bac, empleando nitr\u00f3geno liquido, en presencia de estabilizadores e inhibidores de rnasas. an\u00e1lisis de la quimosina del cuajar de b\u00fafalo. a partir de un machacado directo del cuajar del b\u00fafalo se extrajo un concentrado enzim\u00e1tico libre de c\u00e9lulas mediante centrifugaci\u00f3n y posterior filtraci\u00f3n. As\u00ed, se llevar\u00e1n a cabo ensayos de coagulaci\u00f3n sobre leche con la idea de evaluar la eficacia del enzima para elaborar masas queseras. Asimismo, se realizar\u00e1n ensayos bioqu\u00edmicos empleando diversos inhibidores de proteasas, permiti\u00e9ndonos de este modo atribuir la actividad coagulante a una proteasa aspartica. extracci\u00f3n de rna total a partir de un cuajar de bubalus arnee bubalis. la extracci\u00f3n de rna a partir de las muestras congeladas se llev\u00f3 cabo usando el rnaeasy mini kit (qiagen). Todas las superficies, material, tampones y reactivos deben estar libres de rnasas. Para ello se emplearon detergentes y depc (dietilpirocarbonato). En primer lugar se lis\u00f3 el tejido usando un potterdespu\u00e9s se homogeneiz\u00f3 usando unas columnas qiashredder spin column (qiagen). Y a continuaci\u00f3n se procedi\u00f3 a la extracci\u00f3n, lavado y eluci\u00f3n del rna, tal como indican las instrucciones para la extracci\u00f3n de tejidos animales. electroforesis, cuantificaci\u00f3n y estimaci\u00f3n del grado de pureza del rna extra\u00eddo. antes de realizar la amplificaci\u00f3n del gen se hace necesario evaluar su grado de pureza para descartar una posible contaminaci\u00f3n con dna, que interferir\u00eda en el proceso de rt-pcr. Para ello, el rna extra\u00eddo fue cuantificado y evaluado en un espectrofot\u00f3metro a 260 nm. A continuaci\u00f3n, se visualiz\u00f3 el rna en un gel con formaldeh\u00eddo. Todo el material y reactivos necesarios para llevar cabo la electroforesis fueron tratados con depc. 4 dise\u00f1o de oligonucle\u00f3tidos para la amplificaci\u00f3n del gen de la quimosina del b\u00fafalo a partir de rna. los oligonucle\u00f3tidos que se usaron para la amplificaci\u00f3n del gen de la quimosina de b\u00fafalo fueron dise\u00f1ados a partir de la secuencia del gen de la quimosina de bubalus arnee bubalis (c\u00f3digo de acceso del genbank; af177290), as\u00ed como a partir del gen de la quimosina aislado a partir de bos taurus (c\u00f3digo de acceso del genbank; nm_180994), ya que el grado de homolog\u00eda entre ambos genes es del 97 %. Estos datos nos permitir\u00e1 dise\u00f1ar oligonucle\u00f3tidos flanqueando los extremos de la preproquimosina, de la proquimosina y de la quimosina. amplificaci\u00f3n del gen de la quimosina del b\u00fafalo a partir del rna extraido. la amplificaci\u00f3n del gen de la quimosina del b\u00fafalo se llev\u00f3 cabo a partir del rna obtenido, previamente tratado con dnasas, y los oligonucle\u00f3tidos dise\u00f1ados tal como se describe en el apartado anterior. Se utilizar\u00e1n retrotranscriptasas y polimerasas que conducir\u00e1n a la trascripci\u00f3n previa del rna a cdna, seguida de una amplificaci\u00f3n del cdna. El cdna obtenido fue cuantificado y visualizado mediante electroforesis. Se evalu\u00f3, asimismo, su grado de pureza. objetivo 2; clonaci\u00f3n y expresi\u00f3n del gen de la quimosina del b\u00fafalo en e. coli. en primer lugar, se realiz\u00f3 la clonaci\u00f3n y expresi\u00f3n del gen amplificado en e. Coli, por ser esta bacteria susceptible de manipulaci\u00f3n gen\u00e9tica, por ser de crecimiento r\u00e1pido y por el bajo coste de su cultivo. Utilizamos, para la expresi\u00f3n del gen los vectores puc19 y pet12 para su posterior expresi\u00f3n. clonaci\u00f3n del gen de la quimosina del b\u00fafalo en el vector pcr-blunt-ii-topo. con el objeto de clonar los genes amplificados (preproquimosina, proquimosina y quimosina) de forma r\u00e1pida y sencilla se utiliz\u00f3 el pcr blunt ii topo pcr cloning kit.Las mol\u00e9culas, con extremos romos se ligaron, de esta manera, en el vector pcrblunt ii-topo para luego transformar una cepa de e. Coli top10. Este sistema de clonaci\u00f3n permite la posterior ingenierizaci\u00f3n de las mol\u00e9culas a otros vectores con relativa facilidad, adem\u00e1s de que facilita la secuenciaci\u00f3n del inserto, indispensable para comprobar su naturaleza. subclonaci\u00f3n del gen de la quimosina del b\u00fafalo en los vectores puc19 y pet12. con el fin de expresar la quimosina del b\u00fafalo en e. Coli, los insertos librados del vector pcr-blunt ii-topo, empleando enzimas de restricci\u00f3n adecuadas, fueron subclonados posteriormente en los vectores puc19 y pet12 en la orientaci\u00f3n id\u00f3nea, con respecto al promotor. Las construcciones obtenidas ser\u00e1n empleadas para transformar las cepas correspondientes de e. Coli donde se analizar\u00e1 la expresi\u00f3n, mediante inducci\u00f3n con iptg. an\u00e1lisis de la expresi\u00f3n del gen de la quimosina del b\u00fafalo en e. Coli. 5 las cepas de e. Coli recombinantes portadoras del gen de la preporquimosina, proquimosina y quimosina fueron cultivadas en presencia de iptg para analizar su expresi\u00f3n. Los niveles de expresi\u00f3n fueron evaluados en el interior celular, en el periplasma y en el sobrenadante. Adem\u00e1s, se realizaron ensayos de activaci\u00f3n mediante acidificaci\u00f3n\/neutralizaci\u00f3n. No se encontr\u00f3 actividad coagulante en ninguno de los clones obtenidos. objetivo 3; clonaci\u00f3n y expresi\u00f3n del gen de la quimosina del b\u00fafalo en levaduras. las levaduras han demostrado ser excelentes hospedadoras para la expresi\u00f3n de prote\u00ednas heter\u00f3logas. As\u00ed, nos planteamos la clonaci\u00f3n y expresi\u00f3n del gen de la quimosina del b\u00fafalo en levaduras. elecci\u00f3n del hu\u00e9sped. en un principio nos planteamos la clonaci\u00f3n y expresi\u00f3n de las secuencias codificantes para la preproquimosina, proquimosina y quimosina de b\u00fafalo en dos levaduras, pichia pastoris y saccharomyces cerevisiae. Pero tras los buenos resultados obtenidos con la p. Pastoris decidimos centrarnos y tratar de mejorar la expresi\u00f3n en esta levadura. Con esta levadura conseguimos obtener quimosina en estado activo en el sobrenadante sin necesidad de activaci\u00f3n previa. clonaci\u00f3n y expresi\u00f3n del gen de la quimosina del b\u00fafalo en pichia pastoris empleando el vector pgapz\u00c2\u00bf. con este vector se construy\u00f3 una fusi\u00f3n traduccional bajo el promotor constitutivo pgap, que const\u00f3 del p\u00e9ptido se\u00f1al del factor \u00c2\u00bf de s. Cerevisiae que facilita la secreci\u00f3n al exterior celular y una de las tres secuencias clonadas previamente en el vector pcr blunt ii topo (preproquimosina, proquimosina o quimosina). una vez obtenidas las diferentes construcciones en e. Coli se transfirieron a p. Pastoris integrando la construcci\u00f3n en su genoma. La construcci\u00f3n portadora de la secuencia de la proquimosina consigui\u00f3 niveles de expresi\u00f3n muy superiores a los de la construcci\u00f3n realizada con la preproquimosina ya que en este caso no fue preciso concentrar el sobrenadante. En cuanto a la construcci\u00f3n realizada con la quimosina no fue activa. caracterizaci\u00f3n bioqu\u00edmica de la quimosina de b. Arnee bubalis expresada en p. pastoris. se determinaron los par\u00e1metros cin\u00e9ticos (km y vmax), los valores de ph y temperatura \u00f3ptimos de actuaci\u00f3n del enzima empleando el m\u00e9todo dise\u00f1ado por ageitos et al. (2006). La determinaci\u00f3n del peso molecular se realizo por electroforesis empleando para ello un patr\u00f3n de pesos moleculares. clonaci\u00f3n y expresi\u00f3n de la proquimosina del b\u00fafalo en pichia pastoris empleando el vector phil-s1. 6 con este vector se construy\u00f3 una fusi\u00f3n traduccional bajo el promotor inducible aox1, que const\u00f3 de un p\u00e9ptido se\u00f1al que facilita la secreci\u00f3n al exterior celular (p\u00e9ptido se\u00f1al del gen pho1) y la secuencia correspondiente a la proquimosina de b\u00fafalo. clonaci\u00f3n y expresi\u00f3n de la proquimosina del b\u00fafalo en pichia pastoris empleando el vector ppicz\u00c2\u00bf. con este vector se construyo una fusi\u00f3n traduccional bajo el promotor inducible aox1 que consto de un p\u00e9ptido se\u00f1al que facilita la secreci\u00f3n al exterior celular (p\u00e9ptido se\u00f1al del factor \u00c2\u00bf de s. Cerevisiae) y la secuencia correspondiente a la proquimosina de b\u00fafalo. analisis comparativo de la producci\u00f3n de proquimosina entre los diferentes clones de p. pastoris obtenidos. una vez probadas estas tres alternativas diferentes para la expresi\u00f3n de la proquimosina (pgapz\u00c2\u00bf, phil-s1, y ppicz\u00c2\u00bf), se eligi\u00f3 la construcci\u00f3n realizada con el vector pgapz\u00c2\u00bf. Esta construcci\u00f3n fue la que presento mayor nivel de expresi\u00f3n de proquimosina objetivo 4; mejora de la producci\u00f3n de la proquimosina clonada en el vector pgapz\u00c2\u00bf y expresada en p. Pastoris. optimizaci\u00f3n del proceso de fermentaci\u00f3n. para optimizar el proceso de fermentaci\u00f3n se determinaron la temperatura y aireaci\u00f3n \u00f3ptima en matraz para posteriormente optimizar un proceso de fermentaci\u00f3n con adici\u00f3n en continuo de glucosa elevando de este modo la densidad celular de cultivo y la actividad enzim\u00e1tica en el sobrenadante optimizaci\u00f3n de la expresi\u00f3n. para mejorar los niveles de expresi\u00f3n se actu\u00f3 a dos niveles. el primero de ellos consisti\u00f3 en incrementar la dosis g\u00e9nica (numero de cassettes de expresi\u00f3n). Para conseguir esto se retransform\u00f3 una cepa que ya contiene en su genoma un cassette de expresi\u00f3n con la misma construcci\u00f3n. Al utilizar cantidades crecientes del factor de selecci\u00f3n, se seleccionan de este modo los clones m\u00e1s resistentes. Estos clones m\u00e1s resistentes tendr\u00e1n m\u00e1s copias del gen. Con esta estrategia no se obtuvieron mejoras en la actividad enzim\u00e1tica. el segundo nivel de actuaci\u00f3n consisti\u00f3 en la optimizaci\u00f3n del uso de codones por mutag\u00e9nesis dirigida. Con esta estrategia se consigui\u00f3 duplicar la actividad enzim\u00e1tica obtenida en el sobrenadante. objetivo 5; an\u00e1lisis comparativo entre la actividad coagulante del chymax y el sobrenadante de cultivo de una cepa productora de quimosina de b\u00fafalo. la comparaci\u00f3n entre la actividad coagulante del chy-max y la quimosina recombinante de b\u00fafalo se efectu\u00f3 en base un an\u00e1lisis f\u00edsico-qu\u00edmico de las masas queseras elaboradas con ambas quimosinas y a una comparaci\u00f3n de la actividad 7 enzim\u00e1tica por el m\u00e9todo descrito por ageitos et al. (2006). El cuajo de b\u00fafalo recombinante es totalmente equiparable al cuajo comercial por lo que ser\u00eda perfectamente utilizable en la industria quesera. En cuanto a la actividad enzim\u00e1tica, el chy-max mostr\u00f3 una actividad enzim\u00e1tica tan solo 24 veces superior al sobrenadante de cultivo de la cepa recombinante de p. Pastoris sin concentrar. Estos resultados hacen que podamos tener en cuenta este nuevo producto biotecnol\u00f3gico procedente de p. Pastoris como una seria alternativa al producto dominante del mercado mundial de cuajos para la elaboraci\u00f3n de queso.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Obtenci\u00f3n de un microorganismo productor de quimosina de b\u00fafalo con aplicabilidad biotecnol\u00f3gica<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Obtenci\u00f3n de un microorganismo productor de quimosina de b\u00fafalo con aplicabilidad biotecnol\u00f3gica <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Juan  Andr\u00e9s Vallejo Vidal <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Santiago de compostela<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 27\/11\/2009<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Margarita Poza Dom\u00ednguez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: germ\u00e1n Larriba calle <\/li>\n<li>Miguel Vi\u00f1as ciordia (vocal)<\/li>\n<li>germ\u00e1n Naharro carrasco (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 pedro Martinez garcia (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Juan Andr\u00e9s Vallejo Vidal Introducci\u00f3n las proteasas son enzimas capaces de catalizar la ruptura de enlaces pept\u00eddicos. 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