{"id":98278,"date":"2018-03-11T10:19:02","date_gmt":"2018-03-11T10:19:02","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/epidemiologa%c2%ada-y-variabilidad-patogenica-del-virus-del-mosaico-del-pepino-dulce-pepino-mosaic-virus-nuevas-enfermedades-emergentes-asociadas-a-su-presencia-torrao-o-cribado\/"},"modified":"2018-03-11T10:19:02","modified_gmt":"2018-03-11T10:19:02","slug":"epidemiologa%c2%ada-y-variabilidad-patogenica-del-virus-del-mosaico-del-pepino-dulce-pepino-mosaic-virus-nuevas-enfermedades-emergentes-asociadas-a-su-presencia-torrao-o-cribado","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/virus-de-las-plantas\/epidemiologa%c2%ada-y-variabilidad-patogenica-del-virus-del-mosaico-del-pepino-dulce-pepino-mosaic-virus-nuevas-enfermedades-emergentes-asociadas-a-su-presencia-torrao-o-cribado\/","title":{"rendered":"Epidemiolog\u00eda y variabilidad patog\u00e9nica del virus del mosaico del pepino dulce (pepino mosaic virus). nuevas enfermedades emergentes asociadas a su presencia (torrao o cribado)."},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Ana Olvido Alfaro Fern\u00e1ndez <\/strong><\/h2>\n

El virus del mosaico del pepino dulce (pepino mosaic virus, pepmv) es uno de los principales virus que afectan al cultivo del tomate y est\u00e1 ampliamente extendido por las diferentes zonas productoras del mundo, donde provoca importantes p\u00e9rdidas econ\u00f3micas. Su eficiente transmisi\u00f3n mec\u00e1nica hace que se trate de un virus de r\u00e1pida dispersi\u00f3n y dif\u00edcil control. La gran variabilidad sintomatol\u00f3gica unida a una gran diversidad molecular, dificulta su diagn\u00f3stico. Por el momento existen cinco genotipos caracterizados, aunque a\u00fan no se conoce que regi\u00f3n del genoma del virus se encarga de la expresi\u00f3n de los s\u00edntomas. La construcci\u00f3n de clones infecciosos y su marcaje con prote\u00ednas fluorescentes es una herramienta eficaz para profundizar en el conocimiento de la biolog\u00eda molecular de los virus vegetales. Del mismo modo, la interacci\u00f3n del pepmv con otros agentes como el hongo olpidium brassicae sensu lato (sl) se ha relacionado con el s\u00edndrome del colapso, pero a\u00fan se desconoce si dicha relaci\u00f3n lleva asociada la transmisi\u00f3n del virus por este hongo vector. por tanto, se desarroll\u00f3 un m\u00e9todo de diagn\u00f3stico que permit\u00eda la identificaci\u00f3n y detecci\u00f3n simult\u00e1nea de los cinco genotipos del pepmv descritos por el momento: europeo (eu), peruano (pe), chileno 1\/us1 (ch1\/us1), chileno 2 (ch2) y us2. El m\u00e9todo dise\u00f1ado consist\u00eda, en primer lugar en la realizaci\u00f3n de una multiplex rt-pcr en un paso, con una mezcla de seis de cebadores espec\u00edficos que amplifican una zona del gen de la rna polimerasa rna dependiente del virus, incluyendo un control interno, separ\u00e1ndose as\u00ed tres grupos de genotipos diferentes: eu\/pe, ch1\/us1 y ch2\/us2. Para diferenciar el genotipo presente en la muestra entre los cinco determinados, se llev\u00f3 a cabo un an\u00e1lisis de restricci\u00f3n con el enzima saci con el producto de pcr obtenido. El m\u00e9todo present\u00f3 un l\u00edmite de detecci\u00f3n y sensibilidad mayor que otras t\u00e9cnicas de diagn\u00f3stico com\u00fanmente empleadas. por otro lado, se construy\u00f3 un clon infeccioso de pepmv a partir del genoma completo de un aislado del genotipo ch2 de pepmv, consiguiendo transcritos in vitro capaces de reproducir la misma sintomatolog\u00eda que el aislado original tras la inoculaci\u00f3n mec\u00e1nica a nicotiana occidentalis h-h wheeler. Posteriormente, se obtuvo un clon mutante de ese mismo aislado con el gen de la prote\u00edna fluorescente verde gfp, incluido en la regi\u00f3n interg\u00e9nica existente entre la orf 4 y 5 del pepmv. para verificar la capacidad de o. Brassicae sl (concretamente la especie olpidium virulentus (sahtiyanci) karting) para transmitir el pepmv, se realizaron dos experimentos en c\u00e1mara de cultivo donde se consigui\u00f3 la transmisi\u00f3n del virus a planta de tomate sana mediante el riego de \u00e9sta \u00faltima con el percolado obtenido tras el riego de plantas infectadas con pepmv que conten\u00edan un cultivo de o. Virulentus en sus ra\u00edces, procedente de tomate. en otro orden de cosas, en 2007 se identific\u00f3 como agente causal de la enfermedad conocida como torrao, al nuevo virus tomato torrado virus (totv). Este hecho determin\u00f3 la necesidad de conocer diversos aspectos de su epidemiolog\u00eda, diagn\u00f3stico, variabilidad y posible efecto sin\u00e9rgico de \u00e9ste con otras virosis que afectan habitualmente al cultivo del tomate en espa\u00f1a. Para ello, en primer lugar se estudiaron la incidencia y distribuci\u00f3n de la enfermedad del torrao, realizando muestreos en las principales zonas productoras de espa\u00f1a desde 2001 a 2008. Se recogieron 451 muestras en 92 invernaderos, se clasificaron por su sintomatolog\u00eda y se analizaron frente a diversos virus. M\u00e1s del 75% de las muestras analizadas resultaron positivas a totv, de las cuales la mayor\u00eda mostraban los s\u00edntomas t\u00edpicos de la enfermedad, sin embargo, algunas mostraban otras manifestaciones de necrosis y otras incluso resultaron asintom\u00e1ticas. El 60,5% de las plantas analizadas presentaron co-infecci\u00f3n de totv y pepmv, y una peque\u00f1a proporci\u00f3n resultaron infectadas con otras virosis del tomate. Asimismo, se demostr\u00f3 que la detecci\u00f3n de totv mediante hibridaci\u00f3n molecular con improntas de de tejido sobre la membrana es una t\u00e9cnica eficaz para el diagn\u00f3stico r\u00e1pido de este nuevo virus. Adicionalmente, se muestrearon y analizaron frente a totv diferentes especies de la flora arvense encontradas en invernaderos de tomate de murcia, gran canaria y tenerife, de las cuales 22 pertenecientes a diversos g\u00e9neros bot\u00e1nicos resultaron positivas al virus. una vez analizadas las muestras de campo, se eligieron aquellas que presentaron infecciones simples con totv, as\u00ed como otras muestras que estaban infectadas con este virus y otros encontrados habitualmente afectando al cultivo de tomate. Estas muestras se observaron mediante microscop\u00eda electr\u00f3nica de transmisi\u00f3n para estudiar los efectos citopatol\u00f3gicos inducidos por el totv y evaluar el posible efecto sin\u00e9rgico de la co-infecci\u00f3n de \u00e9ste con otras entidades virales a nivel ultraestructural. Las hojas infectadas \u00fanicamente con totv no presentaron grandes alteraciones celulares, a pesar de que se observaron cuerpos de inclusi\u00f3n conteniendo part\u00edculas virales isom\u00e9tricas en las c\u00e9lulas parenquim\u00e1ticas del floema. Los tejidos con infecciones dobles de totv y pepmv, o totv y tomato chlorosis virus (tocv) manifestaron mayores alteraciones. Sin embargo, el efecto m\u00e1s perjudicial para los tejidos fue el causado por la infecci\u00f3n triple de tocv, pepmv y tomato spotted wilt virus (tswv) donde se observ\u00f3 un claro engrosamiento de la pared celular acompa\u00f1ado de una gran cantidad de c\u00e9lulas necrosadas. finalmente, se estudi\u00f3 la variabilidad gen\u00e9tica de 19 aislados espa\u00f1oles de totv recogidos en diversas \u00e1reas productoras de tomate del pa\u00eds a lo largo de 9 a\u00f1os. En el estudio tambi\u00e9n se incluyeron tres aislados h\u00fangaros del virus. Se estudiaron cinco regiones del genoma del virus: proteasa-cofactor, la rna polimerasa rna dependiente, la prote\u00edna de movimiento y dos subunidades de la prote\u00edna de la c\u00e1pside (vp35 y vp23). Todos los aislados presentaron una gran similitud en todas las zonas estudiadas. Los an\u00e1lisis filogen\u00e9ticos revelaron un \u00fanico grupo que englobaba a todos los aislados del totv estudiados separ\u00e1ndolos de otros virus del nuevo g\u00e9nero propuesto torradovirus. Sin embargo, se observ\u00f3 un subgrupo en las dos subunidades de la cp estudiadas constituido por los aislados de tomate recogidos en gran canaria y un aislado procedente de s. Nigrum recogido en tenerife. Las regiones estudiadas estaban bajo una fuerte presi\u00f3n de selecci\u00f3n negativa, encontr\u00e1ndose nueve nucle\u00f3tidos bajo presi\u00f3n de selecci\u00f3n negativa repartidos entre diversas zonas del genoma, frente a uno en la zona de la proteasa-cofactor bajo presi\u00f3n de selecci\u00f3n positiva.<\/p>\n

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Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abEpidemiolog\u00eda y variabilidad patog\u00e9nica del virus del mosaico del pepino dulce (pepino mosaic virus). nuevas enfermedades emergentes asociadas a su presencia (torrao o cribado).<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
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  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Epidemiolog\u00eda y variabilidad patog\u00e9nica del virus del mosaico del pepino dulce (pepino mosaic virus). nuevas enfermedades emergentes asociadas a su presencia (torrao o cribado). <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Ana Olvido Alfaro Fern\u00e1ndez <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Polit\u00e9cnica de Valencia<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 18\/12\/2009<\/li>\n<\/ul>\n

     <\/p>\n

    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
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    • Director de la tesis<\/strong>\n
        \n
      • Mar\u00eda Concepci\u00f3n Jord\u00e1 Guti\u00e9rrez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: c\u00e1ndido Santiago \u00e1lvarez <\/li>\n
        • gustavo nuno Barbosa nolasco (vocal)<\/li>\n
        • vicente Medina piles (vocal)<\/li>\n
        • alfredo Lacasa plasencia (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

           <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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