{"id":98900,"date":"2018-03-11T10:19:49","date_gmt":"2018-03-11T10:19:49","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/aplicacion-de-metodos-bioqua%c2%admicos-a-la-caracterizacion-de-anta%c2%adgenos-bacterianos-de-uso-vacunal\/"},"modified":"2018-03-11T10:19:49","modified_gmt":"2018-03-11T10:19:49","slug":"aplicacion-de-metodos-bioqua%c2%admicos-a-la-caracterizacion-de-anta%c2%adgenos-bacterianos-de-uso-vacunal","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/ciencias-medicas\/aplicacion-de-metodos-bioqua%c2%admicos-a-la-caracterizacion-de-anta%c2%adgenos-bacterianos-de-uso-vacunal\/","title":{"rendered":"Aplicaci\u00f3n de m\u00e9todos bioqu\u00edmicos a la caracterizaci\u00f3n de ant\u00edgenos bacterianos de uso vacunal."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Ileana Mart\u00ednez Cabrera <\/strong><\/h2>\n<p>El desarrollo cient\u00edfico alcanzado en el campo de las vacunas exige la conformaci\u00f3n de nuevos \u00edndices de calidad en los que es necesaria la incorporaci\u00f3n de nuevos m\u00e9todos anal\u00edticos que complementen la metodolog\u00eda de evaluaci\u00f3n existente. La integraci\u00f3n de estos m\u00e9todos en una metodolog\u00eda, los aportes que se realizan al conocimiento para el control de la vacuna antimeningoc\u00f3cica va-mengoc bc\u00c2\u00ae (hasta el momento es la \u00fanica vacuna contra el serogrupo b de neisseria meningitidis) y su aplicaci\u00f3n integral en la evaluaci\u00f3n de nuevas formulaciones, constituye la novedad cient\u00edfico-pr\u00e1ctica del presente trabajo. el objetivo del trabajo es aplicar los m\u00e9todos bioqu\u00edmicos capaces de complementar la evaluaci\u00f3n de ant\u00edgenos vacunales tales como: ves\u00edculas de membrana externa (vme) de neisseria meningitidis, serogrupo  b;  polisac\u00e1rido de neisseria meningitidis, serogrupo  c (componentes de va-mengoc bc\u00c2\u00ae ) y extender su aplicaci\u00f3n al polisac\u00e1rido vi de salmonella typhi, a las vme de shigella, v. Cholerae, pseudomona aeruginosa, prote\u00ednas de leptospira interrogans y ant\u00edgenos lip\u00eddicos de mycobacterium tuberculosis y en ves\u00edculas de membrana externa de v. Cholerae y n. Meningitidis .  la tesis consta de un dise\u00f1o anal\u00edtico metodol\u00f3gico para completar el estudio f\u00edsico &#8211; qu\u00edmico e inmunoqu\u00edmico y el control de la calidad de los dos ant\u00edgenos de la vacuna antimeningoc\u00f3cica:  1.Ves\u00edculas de membrana externa (vme) serogrupo b, de neisseria meningitidis  2.Polisac\u00e1rido serogrupo c, de neisseria meningitidis.  este trabajo propone m\u00e9todos que utilizan los investigadores a nivel mundial pero de forma aislada. Estos m\u00e9todos fueron estandarizados y validados, posteriormente, fueron aprobados por el centro estatal de control m\u00e9dico y productos biol\u00f3gicos de cuba (cecmed), para su ejecuci\u00f3n e incorporaci\u00f3n en el registro m\u00e9dico sanitario de la vacuna antimeningoc\u00f3cica cubana va-mengoc bc\u00c2\u00ae. 1.Ves\u00edculas de membrana externa (vme) en primer lugar, se realiz\u00f3 la complementaci\u00f3n de la caracterizaci\u00f3n de las vme y se concluy\u00f3 que tanto la cromatograf\u00eda de tamizaje molecular como la microscop\u00eda electr\u00f3nica permiten el control de la morfolog\u00eda vesicular.  los m\u00e9todos de sds-page, western blot, tipificaci\u00f3n del lipopolisac\u00e1rido, secuenciaci\u00f3n del gen pora (que da la clasificaci\u00f3n de la cepa a partir de la que se extrae la vme) y dot blot (para prote\u00ednas de uni\u00f3n a transferrina) permiten caracterizar la identidad proteica de este ant\u00edgeno en diferentes etapas de su desarrollo y producci\u00f3n. Los resultados sugieren que los nuevos criterios propuestos para identidad y morfolog\u00eda  vesicular pueden ser incorporados al dise\u00f1o de estudios de estabilidad, conjuntamente con los an\u00e1lisis calorim\u00e9tricos y de espectroscopia de fluorescencia.  la incorporaci\u00f3n del m\u00e9todo de western blot para la detecci\u00f3n de las enzimas contaminantes dnasa y rnasa result\u00f3 ser adecuada para caracterizar el par\u00e1metro de pureza y no se detect\u00f3 la presencia de estos contaminantes en lotes de producci\u00f3n. Los patrones de caracterizaci\u00f3n f\u00edsico &#8211; qu\u00edmico e inmunoqu\u00edmico de las vme (como materia prima) se relacionaron con la inmunogenicidad cuando ya forma parte de la vacuna, determinada a trav\u00e9s de un m\u00e9todo elisa y con la adsorci\u00f3n de esta materia prima en el adyuvante hidr\u00f3xido de aluminio. 2.Polisac\u00e1rido c de neisseria meningitidis en segundo lugar, se complet\u00f3 la caracterizaci\u00f3n de este ant\u00edgeno polisacar\u00eddico, demostr\u00e1ndose que la combinaci\u00f3n de los m\u00e9todos de tamizaje molecular, contenido de o-acetilo y viscosidad permite la determinaci\u00f3n de la integridad molecular de esta materia prima. La aplicaci\u00f3n de m\u00e9todos de identidad como resonancia magn\u00e9tico nuclear (rmn) e inmunoqu\u00edmicos como la aglutinaci\u00f3n con l\u00e1tex, permitieron demostrar la presencia de estructuras con espectros similares a los obtenidos por instituciones internacionales de control y patrones de reconocimiento inmunoqu\u00edmico espec\u00edfico.  se realizaron los estudios de estabilidad a trav\u00e9s de la combinaci\u00f3n de los m\u00e9todos propuestos los cuales indicaron que el polisac\u00e1rido c es estable hasta 18 meses, conservado a &#8211; 20 oc despu\u00e9s de ser purificado. El an\u00e1lisis del par\u00e1metro pureza permiti\u00f3 sugerir la incorporaci\u00f3n del m\u00e9todo de sds-page para la detecci\u00f3n de lps y su posible complementaci\u00f3n con el m\u00e9todo de evaluaci\u00f3n de pir\u00f3genos en conejo. 3.Otros ant\u00edgenos se aplic\u00f3 la metodolog\u00eda completa para la caracterizaci\u00f3n de polisac\u00e1rido vi de salmonella typhi, ant\u00edgeno que se purific\u00f3 en el instituto finlay para ser formulado como vacuna antitifoidea y sustituir la vacuna de c\u00e9lulas enteras que exist\u00eda hasta ese momento. Los resultados permitieron establecer el nuevo sistema de control de calidad de este ant\u00edgeno, a trav\u00e9s de una metodolog\u00eda similar a la aplicada en el polisac\u00e1rido c. el dise\u00f1o utilizado para las vme permiti\u00f3 comenzar la caracterizaci\u00f3n de estructuras similares purificadas a partir de shigella, v. Cholerae, pseudomona aeruginosa, a trav\u00e9s de m\u00e9todos cromatogr\u00e1ficos, electrofor\u00e9ticos (incluyendo estudios preliminares de prote\u00f3mica) e inmunoqu\u00edmicos. en este trabajo se propone una metodolog\u00eda para la purificaci\u00f3n de prote\u00ednas con funciones adhesinas a partir de leptospira interrogans, por la importancia que tienen estas prote\u00ednas en la invasi\u00f3n de este pat\u00f3geno, logr\u00e1ndose purificar una prote\u00edna de uni\u00f3n a fibronectina de aproximadamente 40 kda y otra prote\u00edna de uni\u00f3n a col\u00e1geno de aproximadamente 25 kda.  por \u00faltimo, en el marco de este trabajo se consider\u00f3 conveniente incorporar a la caracterizaci\u00f3n, la identificaci\u00f3n de los fosfol\u00edpidos presentes en las membranas externas de mycobacterium smegamatis por la posible importancia que puede significar su utilizaci\u00f3n como parte de una posible vacuna contra m. Tuberculosis y paralelamente, profundizar en la identificaci\u00f3n de aquellos fosfol\u00edpidos que se conservan formando parte de las vme que se purifican a partir de n. Meningitidis serogrupo b y de v. Cholerae. la introducci\u00f3n de los m\u00e9todos propuestos por la autora en el sistema de control de la calidad de vacunas producidas en al instituto finlay (cuba) y de nuevas formulaciones vacunales ha permitido perfeccionar los criterios de calidad y de caracterizaci\u00f3n de estos productos en este centro nacional de investigaciones y producci\u00f3n de vacunas de uso humano en cuba, con lo cual ha facilitado el perfeccionamiento de los registros m\u00e9dico sanitario de las vacunas, su aplicaci\u00f3n en diferentes pa\u00edses y la posible introducci\u00f3n de los nuevos productos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Aplicaci\u00f3n de m\u00e9todos bioqu\u00edmicos a la caracterizaci\u00f3n de ant\u00edgenos bacterianos de uso vacunal.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Aplicaci\u00f3n de m\u00e9todos bioqu\u00edmicos a la caracterizaci\u00f3n de ant\u00edgenos bacterianos de uso vacunal. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Ileana Mart\u00ednez Cabrera <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Illes balears<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 29\/01\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Christopher Jones<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Juan  jos\u00e9 Arag\u00f3n reyes <\/li>\n<li>isabel Llad\u00f3 sampol (vocal)<\/li>\n<li>Marta Viana arribas (vocal)<\/li>\n<li>carmen Hermida d\u00edaz (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Ileana Mart\u00ednez Cabrera El desarrollo cient\u00edfico alcanzado en el campo de las vacunas exige la conformaci\u00f3n de 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