{"id":99034,"date":"2010-05-02T00:00:00","date_gmt":"2010-05-02T00:00:00","guid":{"rendered":""},"modified":"2010-05-02T00:00:00","modified_gmt":"2010-05-02T00:00:00","slug":"identificacion-y-caracterizacion-de-los-genes-responsables-de-la-actividad-b-cetoacil-acp-sintasa-de-girasol-helianthus-annuus-l-y-ricino-ricinus-communis-l-e-identificacion-y-caracterizacion-d","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sevilla\/identificacion-y-caracterizacion-de-los-genes-responsables-de-la-actividad-b-cetoacil-acp-sintasa-de-girasol-helianthus-annuus-l-y-ricino-ricinus-communis-l-e-identificacion-y-caracterizacion-d\/","title":{"rendered":"Identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de los genes responsables de la actividad b-cetoacil-acp sintasa de girasol (helianthus annuus l.) y ricino (ricinus communis l.), e identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de los genes responsables de la actividad b-cetoacil-coa sintasa en las semillas en desarrollo de girasol"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Damian Gonzalez Mellado <\/strong><\/h2>\n<p>La s\u00edntesis de \u00e1cidos grasos es un proceso omnipresente en todos los organismos, ya que \u00e9stos forman parte esencial de la estructura de los seres vivos. La base fundamental de esta ruta es la agregaci\u00f3n de mol\u00e9culas cortas de hidrocarburos para generar una mol\u00e9cula de mayor longitud. Este proceso se realiza en m\u00faltiples pasos con la participaci\u00f3n de varias enzimas. El primer paso consiste en la generaci\u00f3n de malonil-coa, mol\u00e9cula corta de 3 carbonos, a partir de acetil-coa mediante la actividad de las enzimas acetil-coa carboxilasa (accasa) (e.C. 6.4.1.2) y el malonil-acp generado a partir del malonil-coa por la malonil-coa:acp transacilasa (mcat) (e.C. 2.3.1.39). El malonil-acp generado junto con acetil-coa son utilizados por el complejo \u00e1cido graso sintasa (fas, fatty acid syntase), que realiza la elongaci\u00f3n desde 2 hasta 16 \u00e1tomos de carbono. Este complejo se compone de cuatro actividades enzim\u00e1ticas diferentes: \u00edY-cetoacil-acp sintetasas (kas) (e.C. 2.3.1.41), \u00edY-cetoacil-acp reductasas (e.C. 1.3.1.9), \u00edY-hidroxiacil-acp dehidratasa (e.C. 4.2.1.54-61) y enoil-acp reductasa (e.C. 1.3.1.9).      durante el desarrollo de esta tesis, se han clonado, a partir de semillas en desarrollo de girasol, y secuenciado el cdna hakasiii, codificante de la actividad \u00edY-cetoacil-acp sintasa iii. Este gen se encuentra como copia \u00fanica en el genoma del girasol y se expresa en todos los tejidos estudiados aunque su expresi\u00f3n es mayor durante el desarrollo de las semillas, coincidiendo con la s\u00edntesis activa de l\u00edpidos de reserva. La expresi\u00f3n heter\u00f3loga de hakasiii en e. Coli alter\u00f3 el contenido y composici\u00f3n de \u00e1cidos grasos, implicando la interacci\u00f3n de hakas iii con el complejo fas bacteriano. La caracterizaci\u00f3n in vitro de la prote\u00edna recombinante purificada utilizando un sistema fas bacteriano reconstituido, carente de actividad condensante, mostr\u00f3 la s\u00edntesis de acil-acps que abarcaban de 4 a 10 \u00e1tomos de carbono, no limitando su actividad al primer paso de s\u00edntesis de \u00e1cidos grasos tal y como se hab\u00eda mostrado anteriormente en otras kasiii de plantas.      igualmente, se ha clonado y secuenciado el cdna hakasii, codificante de la actividad \u00edY-cetoacil-acp sintasa ii en el girasol. Este gen, al igual que hakasiii, se encuentra como copia \u00fanica en el genoma del girasol y se expresa de forma constitutiva y niveles similares en todos los tejidos estudiados. La obtenci\u00f3n de prote\u00edna recombinante soluble mediante expresi\u00f3n heter\u00f3loga en e. Coli result\u00f3 infructuosa, encontr\u00e1ndose formando parte de cuerpos de inclusi\u00f3n, tal y como hab\u00eda sucedido con otras kasii de plantas estudiadas anteriormente.      asimismo, a partir de semillas en desarrollo de girasol se ha clonado y secuenciado el cdna de hakasi, que codifica para la actividad \u00edY-cetoacil-acp sintasa i. Este gen, al igual que los anteriores, se encuentra como copia \u00fanica en el genoma del girasol y se expresa de forma constitutiva y niveles similares en todos los tejidos estudiados. De igual forma que en el caso de la prote\u00edna hakasii, la obtenci\u00f3n de prote\u00edna recombinante hakasi soluble mediante expresi\u00f3n heter\u00f3loga en e. Coli result\u00f3 infructuosa, encontr\u00e1ndose formando parte de cuerpos de inclusi\u00f3n. El estudio funcional in vivo de hakasi mediante su introducci\u00f3n por recombinaci\u00f3n en e. Coli bajo el control del promotor del gen fabf en un contexto g\u00e9nico donde se deleccionaron los genes fabf y\/o fabh por recombinaci\u00f3n puso de manifiesto la interacci\u00f3n de esta prote\u00edna con el sistema de s\u00edntesis de \u00e1cidos grasos de la bacteria produciendo una dr\u00e1stica reducci\u00f3n de la tasa de crecimiento de la estirpe que s\u00f3lo pose\u00eda los genes hakas i y ecfabb como \u00fanicas prote\u00ednas condensantes, as\u00ed como la modificaci\u00f3n de la composici\u00f3n de \u00e1cidos grasos.      utilizando la informaci\u00f3n disponible del genoma de ricinus communis l., Se han aislado los tres genes responsables de las actividades \u00edY-cetoacil-acp sintasa i, ii y iii (rckasi, rckasii y rckasiii, respectivamente) para futuros estudios. Al igual que en el caso de los genes kas de girasol s\u00f3lo presentan una copia en el genoma y el an\u00e1lisis de expresi\u00f3n de estos mostr\u00f3 una expresi\u00f3n constitutiva en todos los tejidos, apreci\u00e1ndose un punto m\u00e1ximo de expresi\u00f3n en semillas para los tres genes estudiados en el estad\u00edo 5 de maduraci\u00f3n, y en rckas i y rckas iii un incremento acusado en la ra\u00edz de las pl\u00e1ntulas analizadas. La expresi\u00f3n heter\u00f3loga de rckas iii en e. Coli alter\u00f3 tanto la cantidad como la composici\u00f3n de \u00e1cidos grasos indicando la funcionalidad e interacci\u00f3n de dicho gen con el complejo fas bacteriano.      el estudio filogen\u00e9tico de prote\u00ednas kass mostr\u00f3 dos or\u00edgenes filogen\u00e9ticos distintos. Por un lado, las prote\u00ednas kasiii comparten ancestros con el grupo de las cianobacterias, indicando su origen endosimbi\u00f3tico. Mientras que las prote\u00ednas kasi y kasii muestran un origen filogen\u00e9tico bacteriano no teniendo homologos entre las cianobacterias, apuntando a su presencia en la c\u00e9lula hospedadora donde se produjo la endosimbiosis y adquisici\u00f3n de cloroplastos.       una vez sintetizados los \u00e1cidos grasos en el interior del plastidio\/cloroplasto pasan a formar parte del pool citoplasm\u00e1tico de acil-coas pudiendo sufrir posteriores modificaciones. Una de estas es la elongaci\u00f3n por parte de un comlejo an\u00e1logo a fas, el complejo fae (fatty acid elongase). A partir de semillas en desarrollo de girasol se ha clonado y secuenciado dos cdnas, hakcs1 y hakcs2, que codifican para la actividad \u00edY-cetoacil-coa sintasa. Estos genes se encuentran como copia \u00fanica en el genoma del girasol y el an\u00e1lisis de expresi\u00f3n mostr\u00f3 niveles m\u00e1s altos para hakcs1 en tallo y para hakcs2 en ra\u00edz, mostrando ambos en semilla un incremento de expresi\u00f3n conforme avanzaba la maduraci\u00f3n de esta. La caracterizaci\u00f3n funcional mediante la expresi\u00f3n heter\u00f3loga de los genes hakcs1 y hakcs2 en levaduras modific\u00f3 tanto la cantidad como la composici\u00f3n de \u00e1cidos grasos largos de estas. La complementaci\u00f3n de un mutante carente de actividad elongasa de \u00e1cidos grasos de cadena larga confirm\u00f3 en ambos genes su capacidad condensante.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de los genes responsables de la actividad b-cetoacil-acp sintasa de girasol (helianthus annuus l.) y ricino (ricinus communis l.), e identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de los genes responsables de la actividad b-cetoacil-coa sintasa en las semillas en desarrollo de girasol<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de los genes responsables de la actividad b-cetoacil-acp sintasa de girasol (helianthus annuus l.) y ricino (ricinus communis l.), e identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de los genes responsables de la actividad b-cetoacil-coa sintasa en las semillas en desarrollo de girasol <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Damian Gonzalez Mellado <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Sevilla<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 05\/02\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Enrique Martinez Force<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Francisco javier Florencio bellido <\/li>\n<li>Ana gracia P\u00e9rez rubio (vocal)<\/li>\n<li>eduardo Santero santurino (vocal)<\/li>\n<li>Francisco Javier Cejudo fern\u00e1ndez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Damian Gonzalez Mellado La s\u00edntesis de \u00e1cidos grasos es un proceso omnipresente en todos los organismos, ya 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