{"id":99304,"date":"2018-03-11T10:20:22","date_gmt":"2018-03-11T10:20:22","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/analisis-global-de-la-expresion-de-gens-de-lenguado-solea-senegalensis-y-de-raton-mus-musculus-mediante-genotecas-substractivas-microchips-de-dna-y-qrt-pcr\/"},"modified":"2018-03-11T10:20:22","modified_gmt":"2018-03-11T10:20:22","slug":"analisis-global-de-la-expresion-de-gens-de-lenguado-solea-senegalensis-y-de-raton-mus-musculus-mediante-genotecas-substractivas-microchips-de-dna-y-qrt-pcr","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica-molecular\/analisis-global-de-la-expresion-de-gens-de-lenguado-solea-senegalensis-y-de-raton-mus-musculus-mediante-genotecas-substractivas-microchips-de-dna-y-qrt-pcr\/","title":{"rendered":"Analisis global de la expresion de gens de lenguado (solea senegalensis) y de raton (mus musculus) mediante genotecas substractivas, microchips de dna y qrt-pcr"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Inmaculada Osuna Jimenez <\/strong><\/h2>\n<p>El presente trabajo se ha centrado en dos especies animales de gran importancia en el \u00e1mbito alimentario, sanitario y biom\u00e9dico. As\u00ed, el lenguado senegal\u00e9s (solea senegalensis) es un organismo no modelo de gran inter\u00e9s para la acuicultura por sus grandes expectativas de mercado, pero cuyo cultivo se ve dificultado por diversas patolog\u00edas y su sensibilidad a diferentes situaciones de estr\u00e9s. Por ello, en esta especie se ha analizado la expresi\u00f3n transcripcional en respuesta a 2 mg\/kg de cuso4 (compuesto zoosanitario) o 25 mg\/kg de lps (mim\u00e9tico de infecciones bacterianas). Por otra parte, el rat\u00f3n de laboratorio (mus musculus) es la especie modelo m\u00e1s utilizada en investigaci\u00f3n debido a su gran similitud fisiol\u00f3gica y gen\u00e9tica con el hombre. En m. Musculus, se han realizado estudios de expresi\u00f3n transcripcional, tanto in vivo como in vitro, en respuesta a estr\u00e9s oxidativo por la relaci\u00f3n de este tipo de estr\u00e9s con numerosos procesos fisiopatol\u00f3gicos incluido el c\u00e1ncer. la obtenci\u00f3n de los patrones de expresi\u00f3n diferencial y su an\u00e1lisis funcional se ha abordado desde un punto de vista multidisciplinar, recurriendo a diversas aproximaciones experimentales y metodol\u00f3gicas, como genotecas substractivas, microchips de dna, qrt-pcr en tiempo real y silenciamiento de la expresi\u00f3n g\u00e9nica mediante interferencia por rna (rnai). la obtenci\u00f3n de genotecas substrativas en s. Senegalensis permiti\u00f3 la identificaci\u00f3n de genes diferencialmente expresados en respuesta a cuso4. Adicionalmente, mediante esta t\u00e9cnica, se obtuvo la secuencia parcial de 229 clones, lo que supone un avance considerable en el conocimiento gen\u00f3mico (de acceso p\u00fablico) del lenguado senegal\u00e9s. El microchip desarrollado para la platija europea, p. Flesus (plataforma genipol) result\u00f3 una herramienta muy \u00fatil para analizar la expresi\u00f3n transcripcional de s. Senegalensis. Se estudi\u00f3 la respuesta hep\u00e1tica de lenguados expuestos durante 6 y 24 horas a cuso4 o lps. El an\u00e1lisis funcional de los resultados permiti\u00f3 identificar genes de respuesta espec\u00edfica a cuso4, a lps, o a ambos tratamientos. Asimismo, aunque este microchip se construy\u00f3 con ests procedentes de h\u00edgado de platija, result\u00f3 v\u00e1lido para analizar la respuesta transcripcional del ri\u00f1\u00f3n cef\u00e1lico en el lenguado, discriminando entre genes que codifican transcritos con patrones espec\u00edficos de expresi\u00f3n hep\u00e1tica o renal. el an\u00e1lisis global de la expresi\u00f3n transcripcional en h\u00edgado de rat\u00f3n en respuesta a paraquat (2 horas, 30 mg\/kg, aprox. La mitad de la ld50) se efectu\u00f3 empleando una plataforma comercial de microchips (agilent) donde est\u00e1 representado el genoma completo del rat\u00f3n. El an\u00e1lisis funcional de los  resultados muestra genes relacionados fundamentalmente con la respuesta a estr\u00e9s, el metabolismo de xenobi\u00f3ticos, el crecimiento y muerte celular, y el metabolismo de l\u00edpidos. Asimismo, la detecci\u00f3n de genes de funci\u00f3n desconocida (e.G. Arrdc3) constituye un punto de partida en el estudio de las funciones de las prote\u00ednas que codifican.  el efecto del silenciamiento del gen prdx1 sobre la expresi\u00f3n transcripcional global se analiz\u00f3 en c\u00e9lulas de hepatocarcinoma de rat\u00f3n hepa 1-6 expuestas a 30 \u00c2\u00b5m de cdcl2 durante 2 horas. En las condiciones estudiadas, prdx1 desempe\u00f1a un papel m\u00e1s relevante como reguladora de la actividad celular que como prote\u00edna antioxidante, ya que los genes diferencialmente expresados se relacionaron principalmente con la presentaci\u00f3n de ant\u00edgenos, la se\u00f1alizaci\u00f3n celular, y el crecimiento, proliferaci\u00f3n y muerte celular. Prdx1 parece actuar como un oncog\u00e9n, de manera que la inhibici\u00f3n de su expresi\u00f3n podr\u00eda traducirse en la inducci\u00f3n de apoptosis. se seleccionaron un total de 18 transcritos de lenguado y 17 de rat\u00f3n en funci\u00f3n de la relevancia fisiol\u00f3gica de sus productos y de la magnitud y especificidad de su respuesta para su cuantificaci\u00f3n absoluta por rt-pcr en tiempo real, confirm\u00e1ndose, en general, los resultados obtenidos con las genotecas substractivas y con los microchips de dna. Como cab\u00eda esperar, la cuantificaci\u00f3n por qrt-pcr en tiempo real result\u00f3 ser una metodolog\u00eda m\u00e1s sensible ya que, en la mayor\u00eda de los casos, los cambios de expresi\u00f3n detectados con esta t\u00e9cnica fueron superiores a los obtenidos con los microchips. Asimismo se confirm\u00f3 la importancia de la cuantificaci\u00f3n absoluta de los transcritos frente a la relativa, que tiende a sobredimensionar las variaciones de los transcritos menos abundantes. La cuantificaci\u00f3n absoluta de los transcritos seleccionados no se limit\u00f3 a las muestras empleadas en al an\u00e1lisis global, sino que se ampli\u00f3 a muestras procedentes de diferentes individuos, \u00f3rganos, tratamientos y tiempos de exposici\u00f3n, proporcionando nueva informaci\u00f3n acerca de los perfiles de expresi\u00f3n de los genes analizados y de su variabilidad interindividual.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Analisis global de la expresion de gens de lenguado (solea senegalensis) y de raton (mus musculus) mediante genotecas substractivas, microchips de dna y qrt-pcr<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Analisis global de la expresion de gens de lenguado (solea senegalensis) y de raton (mus musculus) mediante genotecas substractivas, microchips de dna y qrt-pcr <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Inmaculada Osuna Jimenez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 C\u00f3rdoba<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 19\/02\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Mar\u00eda  Jos\u00e9 Prieto Alamo<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: conrado Moreno vivian <\/li>\n<li>Miguel angel Mori\u00f1igo gutierrez (vocal)<\/li>\n<li>Manuel Ru\u00edz rej\u00f3n (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  helena Ferrao ribeiro da costa (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Inmaculada Osuna Jimenez El presente trabajo se ha centrado en dos especies animales de gran importancia en 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