{"id":99523,"date":"2010-04-03T00:00:00","date_gmt":"2010-04-03T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/diseno-de-diluyentes-de-congelacion-de-semen-porcino\/"},"modified":"2010-04-03T00:00:00","modified_gmt":"2010-04-03T00:00:00","slug":"diseno-de-diluyentes-de-congelacion-de-semen-porcino","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/zaragoza\/diseno-de-diluyentes-de-congelacion-de-semen-porcino\/","title":{"rendered":"Dise\u00f1o de diluyentes de congelaci\u00f3n de semen porcino"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Clara Mar\u00eda Malo Ladrero <\/strong><\/h2>\n<p>La criopreservaci\u00f3n de semen es una biotecnolog\u00eda limitada en el ganado porcino. La sensibilidad del espermatozoide, especialmente de verraco, a los descensos de temperatura supone una serie de lesiones concentradas principalmente a nivel de la membrana plasm\u00e1tica y del acrosoma, desembocando en una disfunci\u00f3n celular, que se traduce en menores tasas de fertilidad y prolificidad cuando se aplica el semen congelado a estrategias de inseminaci\u00f3n artificial.  los objetivos que en este estudio se plantean son: 1) determinar la ratio \u00f3ptima de espermatozoides por ovocito para las fertilizaciones in vitro de un macho seleccionado, 2) evaluar el efecto de distintos az\u00facares en la composici\u00f3n del diluyente de congelaci\u00f3n de semen porcino sobre par\u00e1metros seminales in vitro y capacidad de fertilizaci\u00f3n in vitro, 3) evaluar el efecto de distintos antioxidantes adicionados al medio tradicional (ley) sobre par\u00e1metros seminales in vitro y capacidad de fertilizaci\u00f3n in vitro, 4) seleccionar los mejores diluyentes de congelaci\u00f3n de semen porcino, variando el az\u00facar y la presencia o no de antioxidantes en los mismos, atendiendo a los par\u00e1metros seminales in vitro tras descongelaci\u00f3n y validar los diluyentes seleccionados atendiendo a su capacidad de fertilizaci\u00f3n in vitro y as\u00ed poder elegir el m\u00e1s eficiente en t\u00e9minos generales. para realizar nuestro estudio, las muestras de semen fueron obtenidas de un centro de inseminaci\u00f3n y congeladas de acuerdo con el m\u00e9todo de westendorf y cols. (1975) posteriormente modificado (carvajal y cols. 2004; hern\u00e1ndez y cols. 2007). El an\u00e1lisis seminal englobaba dos partes: contrastaci\u00f3n seminal y fertilizaci\u00f3n in vitro. La contrastaci\u00f3n seminal evaluaba una serie de par\u00e1metros rutinarios: motilidad total, motilidad progresiva, viabilidad, integridad acros\u00f3mica y reacci\u00f3n a end\u00f3smosis tras dencongelaci\u00f3n (0, 1, 2 y 3 h). En lo que respecta a las pruebas de fertilizaci\u00f3n in vitro, los ovocitos fueron obtenidos de un matadero industrial, siendo madurados en el laboratorio e inseminados con semen congelado con los distintos diluyentes, para finalmente someterse a cultivo con el fin de valorar tanto par\u00e1metros de fertilidad como de desarrollo embrionario. en la primera experiencia, se realiz\u00f3 un estudio prospectivo para seleccionar un macho y a su vez determinar la ratio de espermatozoides:ovocito (1000:1, 2000:1, 4000:1) m\u00e1s efectiva para el mismo. Se congelaron un total de 39 eyaculados procedentes de distintos machos, revelando un efecto significativo en motilidad y motilidad progresiva tras descongelaci\u00f3n, que result\u00f3 en una preselecci\u00f3n de 16 machos. Estos verracos preseleccionados fueron sometidos a una selecci\u00f3n m\u00e1s exhaustiva bas\u00e1ndonos en los porcentajes de motilidad total, motilidad progresiva, viabilidad, integridad acros\u00f3mica, reacci\u00f3n a end\u00f3smosis y morfoanomal\u00edas. Los mejores resultados se obtuvieron con el macho 478dr. En cuanto a la ratio espermatozoides:ovocito, un total de 781 ovocitos fueron procesados. No se observ\u00f3 un efecto significativo sobre los par\u00e1metros de penetraci\u00f3n, monospermia y eficiencia del sistema, destacando los resultados con la ratio 2000:1(49.1%, 95.2% y 34.3%, respectivamente). Este estudio preliminar nos permiti\u00f3 seleccionar el macho (478dr) para experiencias posteriores as\u00ed como la ratio espermatozoides:ovocito  (2000:1) m\u00e1s eficiente para el mismo en las fertilizaciones in vitro. en la segunda experiencia, se estudi\u00f3 el efecto de distintos az\u00facares (lactosa, trehalosa y glucosa) en la composici\u00f3n del diluyente de congelaci\u00f3n seminal porcina, sobre los par\u00e1metros de calidad seminal in vitro y capacidad de fertilizaci\u00f3n in vitro. La calidad seminal se estudi\u00f3 en diez r\u00e9plicas. Se revel\u00f3 un efecto significativo sobre la integridad del acrosoma desde el momento de descongelaci\u00f3n, que perdur\u00f3 hasta el final del periodo de incubaci\u00f3n, alcanzando valores m\u00e1s elevados cuando la trehalosa estaba presente. Sin embargo, el efecto sobre motilidad, motilidad progresiva, viabilidad y end\u00f3smosis fue m\u00e1s evidente a finales de incubaci\u00f3n. De acuerdo con las pruebas de fertilizaci\u00f3n, un total de 1690 ovoitos fueron procesados. En los resultados obtenidos se apreciaron diferencias en cuanto a las tasas de penetraci\u00f3n, eficiencia y formaci\u00f3n de blastocistos, alcanz\u00e1ndose los valores m\u00e1s elevado tambi\u00e9n en el grupo de la trehalosa. La tasa de divisi\u00f3n embrionaria no vari\u00f3 entre los grupos al igual que el n\u00famero medio de c\u00e9lulas por blastocisto, aunque cabe destacar que fue con el diluyente de trehalosa donde se identificaron los blastocistos con mayor n\u00famero de c\u00e9lulas.  en la tercera experiencia, se estudi\u00f3 el efecto de la adici\u00f3n de distintos antioxidantes (ciste\u00edna, romero y la combinaci\u00f3n de ambos) al diluyente de congelaci\u00f3n de semen porcino ley sobre los par\u00e1metros de calidad seminal in vitro y capacidad de fertilizaci\u00f3n in vitro. Como paso previo, se determin\u00f3 la concentraci\u00f3n de ciste\u00edna m\u00e1s efectiva. Para ello se llevaron a cabo cinco congelaciones en diluyente ley suplementado con ciste\u00edna (0, 5 y 10 mm) y posteriormente las correspondientes contrastaciones. La concentraci\u00f3n 10 mm fue elegida por su efecto beneficioso especialmente a nivel acrosomal. A continuaci\u00f3n, la calidad seminal de los distintos grupos se estudi\u00f3 en diez r\u00e9plicas. Se revel\u00f3 un efecto significativo de la ciste\u00edna y romero, a\u00f1adidos por separado, sobre la viabilidad e integridad acrosomal desde el momento de descongelaci\u00f3n que perdur\u00f3 hasta el final del periodo de incubaci\u00f3n. Sin embargo, solamente el romero ejerc\u00eda una mejora significativa sobre la motilidad progresiva y las tasas de end\u00f3smosis positivas durante todo el proceso de incubaci\u00f3n y a nivel de la motilidad total a las 3 h. De acuerdo con la pruebas de fertilizaci\u00f3n, un total de 2312 ovocitos fueron procesados. En los resultados obtenidos se apreciaron diferencias a favor del diluyente que conten\u00eda romero, en cuanto a los porcentajes de penetraci\u00f3n y eficiencia, mientras que el porcentaje de penetrados monosp\u00e9rmicos no vari\u00f3 entre grupos. Atendiendo a la divisi\u00f3n embrionaria, se produjo un aumento significativo nuevamente en el grupo del romero. Sin embargo, no se apreciaron estas diferencias en los porcentajes de desarrollo embrionario hasta el estad\u00edo de blastocisto ni tampoco en el n\u00famero medio de c\u00e9lulas por blastocisto formado.  en la experiencia 4, para estudiar el efecto de doce diluyentes de congelaci\u00f3n de semen difiriendo entre ellos en la combinaci\u00f3n de dos factores, tipo de az\u00facar (lactosa, trehalosa y glucosa) y la presencia o no de antioxidantes (romero, ciste\u00edna y la combinaci\u00f3n de ambos) sobre los par\u00e1metros seminales tras decongelaci\u00f3n, se llevaron a cabo un total de diez congelaciones con sus respectivas contrastaciones. Seg\u00fan el diluyente utilizado en el proceso de criopreservaci\u00f3n de semen, se produjo un efecto significativo sobre los par\u00e1metros globales obtenidos. Los mejores resultados se mostraron en el grupo que conten\u00eda trehalosa sola o en presencia de romero o de la combinaci\u00f3n de romero y ciste\u00edna al mismo tiempo, acompa\u00f1ados tambi\u00e9n del diluyente con base de lactosa y esencias de romero. Estos cuatro diluyentes fueron los seleccionados para la \u00faltima experiencia.   en la quinta experiencia, para estudiar el efecto de los cuatro diluyentes seleccionados previamente, sobre los par\u00e1metros de fertilidad y desarrollo embrionario, un total de 2523 ovocitos fueron procesados. No se pudieron apreciar diferencias significativas en cuanto a las tasas de penetraci\u00f3n, monospermia y eficiencia entre los distintos grupos, aunque la mayor eficiencia del sistema se observ\u00f3 en el diluyente de lactosa con esencias de romero. En cuanto al desarrollo embrionario, no existieron diferencias significativas entre grupos, aunque el diluyente que conten\u00eda trehalosa como az\u00facar y sin ning\u00fan tipo de suplementaci\u00f3n, fue el que alcanz\u00f3 mayores tasas de desarrollo hasta el estad\u00edo de blastocisto a la par que mayor n\u00famero de c\u00e9lulas por blastocisto formado.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Dise\u00f1o de diluyentes de congelaci\u00f3n de semen porcino<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Dise\u00f1o de diluyentes de congelaci\u00f3n de semen porcino <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Clara Mar\u00eda Malo Ladrero <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Zaragoza<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 04\/03\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Lydia Gil Huerta<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: emilio Espinosa vel\u00e1zquez <\/li>\n<li>Emilio Martinez garcia (vocal)<\/li>\n<li>Carlos Garcia artiga (vocal)<\/li>\n<li>jordi Roca aleu (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Clara Mar\u00eda Malo Ladrero La criopreservaci\u00f3n de semen es una biotecnolog\u00eda limitada en el ganado porcino. La [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[17349,13610],"tags":[50792,203071,4481,24916,48504,77402],"class_list":["post-99523","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-biotecnologia","category-zaragoza","tag-carlos-garcia-artiga","tag-clara-maria-malo-ladrero","tag-emilio-espinosa-velazquez","tag-emilio-Martinez-garcia","tag-jordi-roca-aleu","tag-lydia-gil-huerta"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/99523","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=99523"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/99523\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=99523"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=99523"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=99523"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}