{"id":99691,"date":"2010-12-03T00:00:00","date_gmt":"2010-12-03T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudios-de-expresion-genica-en-sangre-periferica-de-pacientes-con-leucemia-linfoca%c2%adtica-cronica-con-un-microarray-de-oligonucleotidos\/"},"modified":"2010-12-03T00:00:00","modified_gmt":"2010-12-03T00:00:00","slug":"estudios-de-expresion-genica-en-sangre-periferica-de-pacientes-con-leucemia-linfoca%c2%adtica-cronica-con-un-microarray-de-oligonucleotidos","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/zaragoza\/estudios-de-expresion-genica-en-sangre-periferica-de-pacientes-con-leucemia-linfoca%c2%adtica-cronica-con-un-microarray-de-oligonucleotidos\/","title":{"rendered":"Estudios de expresi\u00f3n g\u00e9nica en sangre perif\u00e9rica de pacientes con leucemia linfoc\u00edtica cr\u00f3nica con un microarray de oligonucle\u00f3tidos"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Virginia Leon Navas <\/strong><\/h2>\n<p>La leucemia linfoc\u00edtica cr\u00f3nica (llc) es el tipo de leucemia m\u00e1s com\u00fan en los pa\u00edses occidentales, representando aproximadamente un 24% de todas las leucemias (jemal, et al., 2003). Esta enfermedad afecta a personas de edad avanzada con una edad media al diagn\u00f3stico de 55 a\u00f1os aunque, cada vez se diagnostica en personas m\u00e1s j\u00f3venes. La incidencia es de 1-3 casos por cada 100.000 habitantes y a\u00f1o, siendo la relaci\u00f3n hombre:mujer de 1,7:1 (jemal, et al., 2003).  la llc se caracteriza por la acumulaci\u00f3n progresiva de linfocitos b parcialmente diferenciados, de larga vida y funcionalmente incompetentes (galton, 1966; dameshek, 1967). Este proceso acumulativo es considerado como el resultado de una desregulaci\u00f3n en el mecanismo de muerte celular programada o apoptosis (rozman y montserrat, 1995) que, influye decisivamente en la progresi\u00f3n de la enfermedad. el pron\u00f3stico y curso cl\u00ednico de la llc es extremadamente variable. En algunos pacientes, la enfermedad sigue un curso estable e indolente sin comprometer la esperanza y calidad de vida mientras que, en otros progresa r\u00e1pidamente y la supervivencia tras el diagn\u00f3stico es menor de 2 o 3 a\u00f1os. Aproximadamente en el 50% de los casos, la enfermedad muestra un curso cl\u00ednico intermedio. Por ello, durante los \u00faltimos diez a\u00f1os ha habido un enorme inter\u00e9s en establecer marcadores pron\u00f3sticos fiables para predecir la evoluci\u00f3n de la enfermedad. Sin embargo, hoy por hoy, todav\u00eda se necesitan marcadores pron\u00f3sticos que se confirmen en estudios independientes, preferentemente en ensayos prospectivos, y que puedan analizarse de forma estandarizada. La cuesti\u00f3n esencial es \u00c2\u00bfqu\u00e9 marcadores \u00f3 combinaci\u00f3n ellos deber\u00edan de aplicarse en los ensayos cl\u00ednicos y en la rutina cl\u00ednica? la tecnolog\u00eda de los microarrays de expresi\u00f3n g\u00e9nica permiten medir simult\u00e1neamente la expresi\u00f3n relativa de cientos\/miles de genes entre dos grupos de muestras: control y problema. Dado que los perfiles de expresi\u00f3n g\u00e9nica reflejan las funciones y los procesos celulares que est\u00e1n teniendo lugar en el momento de obtenci\u00f3n de la muestra, es esperable que la comparaci\u00f3n de los patrones de expresi\u00f3n de c\u00e9lulas sanas y tumorales proporcione nuevos conocimientos sobre los cambios asociados a la disfunci\u00f3n celular tumoral y a cualquier ruta regulatoria concomitante. Por ello, esta tecnolog\u00eda se ha aplicado ampliamente en el estudio de la patog\u00e9nesis del c\u00e1ncer, en su clasificaci\u00f3n y subclasificaci\u00f3n, en la predicci\u00f3n de la respuesta a terapia y en la identificaci\u00f3n de nuevas dianas terap\u00e9uticas. hematochip humano 8k (n\u00c2\u00ba de acceso en arrayexpress: amexp-336) es  un microarray de expresi\u00f3n g\u00e9nica de densidad media desarrollado por la fundaci\u00f3n para el estudio de la hematolog\u00eda y la hemoterapia en arag\u00f3n (fehha) para el estudio de neoplasias hematol\u00f3gicas con expresi\u00f3n en sangre perif\u00e9rica (\u00e1lvarez, et al., 2007). Esta herramienta mide la expresi\u00f3n de 538 implicados en: la biolog\u00eda de las c\u00e9lulas hematopoy\u00e9ticas, la proliferaci\u00f3n celular, la activaci\u00f3n del ciclo celular, la transcripci\u00f3n, la apoptosis, las leucemias, los linfomas y el c\u00e1ncer en general. la aplicaci\u00f3n de esta herramienta en el \u00e1rea de las neoplasias hematol\u00f3gicas ha mostrado resultados prometedores (\u00e1lvarez, et al., 2007). As\u00ed pues, podr\u00eda ser una herramienta id\u00f3nea para el estudio de la llc en particular con objeto de identificar nuevos marcadores pron\u00f3sticos \u00f3 de confirmar algunos de los ya existentes. objetivos: los objetivos planteados para este trabajo son:  1. Desarrollar un protocolo de trabajo optimizado y robusto de procesamiento de las muestras para el an\u00e1lisis de la expresi\u00f3n g\u00e9nica con un microarray de oligonucle\u00f3tidos de densidad media, hematochip.  2. Identificar los perfiles de expresi\u00f3n g\u00e9nica de muestras de sangre perif\u00e9rica de pacientes con llc pertenecientes a grupos con distinto pron\u00f3stico en funci\u00f3n de algunos de los principales marcadores conocidos de esta enfermedad.  para ello, es necesario: 2.1. Identificar los genes diferencialmente expresados entre individuos con llc que presentan las siguientes caracter\u00edsticas:  a.\tGenes igvh no mutados vs genes igvh mutados. b.\tDelecci\u00f3n 13q vs cariotipo normal. c.\tTrisom\u00eda 12 vs cariotipo normal. d.\tExpresi\u00f3n de cd38 positiva vs expresi\u00f3n de cd38 negativa. e.\tExpresi\u00f3n de zap-70 positiva vs expresi\u00f3n de zap-70 negativa. 2.2. Validar algunos de los genes obtenidos como diferencialmente expresados en el microarray por pcr cuantitativa a tiempo real (rt-pcr). metodolog\u00eda la metodolog\u00eda necesaria para alcanzar los anteriores objetivos son: 1. Optimizaci\u00f3n del proceso de obtenci\u00f3n de rna total de las muestras de sangre perif\u00e9rica.  2. Optimizaci\u00f3n de las etapas que forman parte del proceso de marcaje de las dianas:   2.1. S\u00edntesis de cdna de cadena sencilla (ss cdna) por transcripci\u00f3n reversa. 2.2. S\u00edntesis de cdna de cadena doble (ds cdna). 2.3. S\u00edntesis y amplificaci\u00f3n de crna biotinilado por transcripci\u00f3n in vitro (ivt) 3. Fragmentaci\u00f3n de crna biotinilado. 4. Hibridaci\u00f3n, tinci\u00f3n y lavados de las dianas marcadas con hematochip en la estaci\u00f3n autom\u00e1tica de hibridaci\u00f3n ventana discovery. 5. Lectura de los biochips hibridados. 6.  An\u00e1lisis de los datos con r para identificar los genes diferencialmente expresados entre los grupos comparados de muestras. 7. Validar los resultados de expresi\u00f3n g\u00e9nica por rt-pcr.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudios de expresi\u00f3n g\u00e9nica en sangre perif\u00e9rica de pacientes con leucemia linfoc\u00edtica cr\u00f3nica con un microarray de oligonucle\u00f3tidos<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudios de expresi\u00f3n g\u00e9nica en sangre perif\u00e9rica de pacientes con leucemia linfoc\u00edtica cr\u00f3nica con un microarray de oligonucle\u00f3tidos <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Virginia Leon Navas <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Zaragoza<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 12\/03\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Pilar Giraldo Castellano<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: martin Gutierrez martin <\/li>\n<li>eduardo Salas p\u00e9rez-rasilla (vocal)<\/li>\n<li>angel Garcia de jalon comet (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  Jos\u00e9 Calasanz abinzano (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Virginia Leon Navas La leucemia linfoc\u00edtica cr\u00f3nica (llc) es el tipo de leucemia m\u00e1s com\u00fan en los 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