{"id":99934,"date":"2018-03-11T10:21:11","date_gmt":"2018-03-11T10:21:11","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/comprehensive-analysis-of-pseudomonas-sp-42a2-lipa-and-lipc-lipases\/"},"modified":"2018-03-11T10:21:11","modified_gmt":"2018-03-11T10:21:11","slug":"comprehensive-analysis-of-pseudomonas-sp-42a2-lipa-and-lipc-lipases","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/barcelona\/comprehensive-analysis-of-pseudomonas-sp-42a2-lipa-and-lipc-lipases\/","title":{"rendered":"Comprehensive analysis of pseudomonas sp. 42a2 lipa and lipc lipases"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Cristina Bofill Bosch <\/strong><\/h2>\n<p>La tesis que lleva por t\u00edtulo comprehensive analysis of pseudomonas sp. 42a2 lipa and lipc lipases se enmarca en los objetivos generales de nuestro grupo de investigaci\u00f3n, que consisten en el aislamiento, caracterizaci\u00f3n y producci\u00f3n de enzimas con inter\u00e9s biotecnol\u00f3gico. En este contexto, la presente tesis doctoral forma parte del proyecto global que tiene como objetivo el desarrollo alternativo de emulsionantes polim\u00e9ricos para ser utilizados en la industria alimentaria. la cepa bacteriana pseudomonas sp. 42a2 transforma secuencialmente, por acci\u00f3n de varias enzimas, el \u00e1cido oleico en derivados hidroxilados, que ser\u00e1n polimerizados posteriormente por acci\u00f3n de una o varias lipasas en est\u00f3lidos (poli\u00e9sters de \u00e1cidos grasos con gran inter\u00e9s biotecnol\u00f3gico). Por ese motivo, la presente tesis doctoral se centr\u00f3 en el aislamiento, la clonaci\u00f3n y la caracterizaci\u00f3n de las lipasas extracelulares lipa y lipc de la cepa pseudomonas sp. 42a2. Incluyendo el an\u00e1lisis de la regulaci\u00f3n g\u00e9nica de ambas enzimas y la optimizaci\u00f3n de sus propiedades bioqu\u00edmicas mediante el uso de t\u00e9cnicas en evoluci\u00f3n dirigida. a partir del estudio del sistema lipol\u00edtico de la cepa pseudomonas sp. 42a2 se identificaron y se aislaron dos genes codificantes lipa y lipc-. Ambos genes se clonaron en la propia cepa parental y se procedi\u00f3 a la purificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de las dos lipasas. Lipa y lipc presentaron diferentes propiedades bioqu\u00edmicas y fisiol\u00f3gicas que les confieren distintos roles en la c\u00e9lula. Por un lado, lipa mostr\u00f3 un car\u00e1cter mes\u00f3filo, preferencia por substratos de cadena mediana e inhibici\u00f3n por la presencia de aceite de oliva. Por el contrario, lipc es una enzima psicr\u00f3fila, con capacidad de adaptaci\u00f3n a distintos substratos en funci\u00f3n de cambios de temperatura, gran tolerancia a iones pesados y con activaci\u00f3n en presencia de aceite de oliva. A parte, se estudi\u00f3 la producci\u00f3n de lipa y lipc de pseudomonas sp. 42a2 en situaci\u00f3n de estr\u00e9s nutritivo, observando un incremento solo de la actividad de lipc. Ambas enzimas se clonaron en los hu\u00e9spedes heter\u00f3logos e. Coli y bacillus subtilis juntamente con la chaperona liph, necesaria para el correcto plegamiento de las dos prote\u00ednas y por lo tanto para obtener la forma enzim\u00e1ticamente activa. Sin embargo, la actividad lipol\u00edtica detectada en los clones recombinantes obtenidos fue siempre mucho menor comparada con la actividad de la cepa parental. Siendo necesario la clonaci\u00f3n de los dos genes por separado (lipasa\/foldasa) y realizar el plegamiento de la enzima in vitro. Para intentar mejorar la clonaci\u00f3n de lipa en hu\u00e9spedes heter\u00f3logos, se procedi\u00f3 a la obtenci\u00f3n de una variante de lipa independiente de foldasa mediante t\u00e9cnicas de evoluci\u00f3n dirigida. Sin embargo, las distintas t\u00e9cnicas empleadas no fueron suficientes para obtener dicha variante, significando que lipa presenta una elevada especificidad y necesidad de liph. A parte, se realiz\u00f3 la mejora de la termoestabilidad de lipc mediante dise\u00f1o racional y evoluci\u00f3n dirigida, obteniendo 10 potenciales variantes enzim\u00e1ticas con m\u00e1s resistencia a la temperatura que la enzima parental.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Comprehensive analysis of pseudomonas sp. 42a2 lipa and lipc lipases<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Comprehensive analysis of pseudomonas sp. 42a2 lipa and lipc lipases <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Cristina Bofill Bosch <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Barcelona<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 24\/03\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Pilar Diaz Lucea<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Mar\u00eda  Jes\u00fas Martinez hernandez <\/li>\n<li>marina Lotti (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Cristina Bofill Bosch La tesis que lleva por t\u00edtulo comprehensive analysis of pseudomonas sp. 42a2 lipa and [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center 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