Tesis doctoral de Néstor Wencelao Meza
La deficiencia en piruvato kinasa eritrocitaria humana (hrpk), un desorden autosómico recesivo producido por mutaciones en el gen pklr, es una de las causas más comunes de anemia hemolítica crónica no esferocítica. La expresión transgénica de la rpk en precursores eritropoyéticos deficientes puede resultar una terapia alternativa en aquellos pacientes con síntomas severos. En este trabajo hemos construido vectores retrovirales que expresan el cdna de la hrpk y la egfp en un único rna mensajero, separados por un ires eucriótico (sf11rpxeg). Líneas celulares murinas 3t3 y mel (células de eritroleucemia murina ) y humanas hela y 293t fueron transducidas con sobrenadantes retrovirales infectivos. análisis de western-blot y de facs demostraron la expresión estable de egfp y hrpk, respectivamente, con expresión estable del transgén durante más de 20 semanas en cultivo. la expresión de los trasngenes no varió significativamente durante el tiempo del cultivo. Además, la inducción a eritrodiferenciación de células mel no modificó la expresión de hrpk ni de egfp. Posteriormente, progenitores hematopoyéticos lin-sca-1+ fueron transducidos in vitro con sf11rpkxeg y transplantado s en receptores normales letalmente irradiados. tres meses post-transplante, una elevada expresión de hrpk y egfp fue observada en leucocitos, plaquetas y eritrocitos maduros. Estos resultados indican que los vectores retrovirales pueden ser una sistema efectivo para abordar la corrección fenotípica de los defectos eritropoyéticos asociados a la deficiencia de piruvato kinasa eritrocitaria humana mediante de protocolos de terapia génica.
Datos académicos de la tesis doctoral «Terapia génica de la deficiencia de piruvato quinasa«
- Título de la tesis: Terapia génica de la deficiencia de piruvato quinasa
- Autor: Néstor Wencelao Meza
- Universidad: Complutense de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 16/12/2005
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Bautista Santa Cruz José Manuel
- Tribunal
- Presidente del tribunal: amando Garrido pertierra
- florinda Gilsanz rodriguez (vocal)
- Jorge Barquinero manez (vocal)
- Juan Antonio Bueren roncero (vocal)
